[发明专利]一种鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法

说明书

一种鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法，包括以下步骤，a、从易感染沙门氏菌的养鸭场内选取感染沙门氏菌的病变鸭子，分离出原始菌株SC26；b、分别经紫外、亚硝基胍诱变原始菌株SC26，获得各自最佳诱变条件，最佳诱变条件下细菌死亡率为80～90%左右，然后以各自最佳诱变条件进行紫外—亚硝基胍复合诱变，得到减弱的诱变菌株SC2261；c、将减弱的诱变菌株SC261扩大培养，制备沙门氏菌减毒疫苗。发明提供的鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法，取发病区当地菌株，免疫原性针对性强，临床效果好，相当于专场专项疫苗。

技术领域

本发明属于动物细菌减毒疫苗领域，具体涉及一种鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法。

背景技术

沙门氏菌是肠杆菌科成员，超过2500个血清型，在自然界分布广泛，几乎所有动物都能发生感染，因为血清型众多，不同动物的感染谱不一样，这给沙门氏菌病的防控带来了很大困难。

要成功摆脱沙门氏菌的困扰，需从整条生产链上各个环节实施防控，即所谓从农场到餐桌，当中主要涉及到饲料工业、养殖场和屠宰加工三个环节，降低畜禽的沙门氏菌感染率被认为是减少畜禽产品沙门氏菌污染的重要措施，除了控制饲料与水源的污染、维持良好的卫生环境、防止老鼠、野鸟传播等基本的卫生和生物安全措施外，使用疫苗可以有效地降低畜禽的沙门氏菌感染率，特别是在沙门氏菌流行率高养殖地区，因为疫苗在一定程度上可以阻止或减少沙门氏菌在肠道定殖，从而降低粪便的排毒量或蛋壳的污染率，还可以降低沙门氏菌在生殖组织的定殖以减少垂直传播，某些血清型如鸡白痢沙门氏菌和马流产沙门氏菌，很容易感染生殖道并在生殖道定殖。

虽然灭活苗和活疫苗都能够减少动物沙门氏菌的感染率和降低其排毒量，但大量研究表明活疫苗比灭活苗能更有效抵御沙门氏菌的感染，原因在于活疫苗可以同时激活体液免疫和细胞免疫，且能够更好诱导Th1反应，这对胞内菌的免疫清除起重要的作用，同时由于沙门氏菌主要通过消化道侵入机体，这对阻止沙门氏菌入侵肠道起到重要作用。由于活疫苗有其它疫苗无可比拟的优势，长期以来，研究者致力于研制安全有效而又遗传稳定的沙门氏菌弱毒株，探索出各种人工致弱的方法，研制出多种安全有效的沙门氏菌弱毒菌株，由于血清型众多，交叉免疫效果不强，故当地采集病原诱变减毒疫苗，制备减毒疫苗能安全有效的防治养殖场沙门氏菌病。

发明内容

针对上述防治禽类特别是鸭养殖场沙门氏菌感染的问题，本发明的目的是提供能够很好预防养殖场沙门氏菌感染的减毒疫苗的制备方法。

本发明的技术方案具体为：

一种鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法，包括以下步骤，

a、从易感染沙门氏菌的养鸭场内选取感染沙门氏菌的病变鸭子，分离出原始菌株；

b、分别经紫外、亚硝基胍诱变原始菌株，获得各自最佳诱变条件，最佳诱变条件下细菌死亡率为80～90%左右，然后以各自最佳诱变条件进行紫外—亚硝基胍复合诱变，得到减弱的诱变菌株；

c、将减弱的诱变菌株扩大培养，制备沙门氏菌减毒疫苗。

所述步骤b具体步骤为，

（1）取感染沙门氏菌的病变鸭子，解剖取病变组织，接种普通LB固体培养基，37℃培养箱中培养18-24h，挑取LB固体培养基长出的圆形边缘整齐,表面光滑,半透明,小凸起的菌落，分别接种于沙门氏菌显色培养基和DHL沙门氏菌鉴定培养基，选择在沙门氏菌显色培养基上显淡紫色、同时在DHL沙门氏菌鉴定培养基上显黑色的菌株，传代纯化后，扩大培养，细菌计数后用生理盐水配制成1×10⁸ - 5×10⁸ CFU/ml的原始菌株菌悬液，保存备用；