[发明专利]黏膜佐剂和递送系统

说明书

本发明涉及一种黏膜佐剂和递送系统。具体地，本文提供佐剂，其包含与醛交联的壳聚糖或甘露糖化的壳聚糖。还提供制备所述佐剂的方法以及将佐剂与抗原组合或连接的方法。所述佐剂抗原组合可用在疫苗制剂中，以及在接种动物的方法中可使用所述疫苗制剂以针对抗原的来源或提高受试者中的免疫应答。

本申请是申请号为201380068777.5，申请日为2013年10月29日，发明名称为“新的黏膜佐剂和递送系统”的中国专利申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本专利申请要求提交日为2012年10月29日的美国临时专利申请号61/719,713 的优先权的权益，其以全文引用并入本文。

技术领域

本发明涉及黏膜佐剂和递送系统的技术领域。

背景技术

佐剂是改变其它试剂例如药物或疫苗效果的药理学或免疫学试剂。佐剂通常包含在疫苗中以增强受体对所提供的抗原的免疫应答，同时将注入的异物保持在最低限度。

佐剂自身并不赋予免疫性。佐剂可以以不同方式作用以提呈抗原至免疫系统。佐剂可以作为抗原的仓库(depot)，在很长一段时间内提呈抗原，从而在身体清除抗原之前使免疫应答最大化。仓库型佐剂的实例是油乳化剂，如弗氏佐剂。佐剂也可以作为导致身体招募并扩大其免疫应答的刺激物。例如，含有每种靶细菌所产生的微量毒素的破伤风、白喉和百日咳疫苗还含有氢氧化铝。铝盐是美国销售疫苗中的常见佐剂，而且在疫苗中已经使用超过70年。

壳聚糖是由随机分布的β-(1-4)-连接的D-葡糖胺(脱乙酰化单元)和N-乙酰基-D-葡糖胺(乙酰化单元)组成的线性多糖。它通过用碱性氢氧化钠处理虾和其它甲壳类壳制成。壳聚糖在用作口服和皮下疫苗载体上取得一些成功。在这里，我们提供新的基于壳聚糖的佐剂制剂，已证明其作为佐剂比传统使用的明矾佐剂表现更佳。具体地，本文提供的基于壳聚糖的佐剂有效刺激IgA应答。

发明内容

本文提供佐剂、包含所述佐剂的疫苗制剂、制备所述佐剂的方法以及使用所述佐剂和疫苗制剂的方法。具体地，壳聚糖和抗原可以通过使用醛进行交联。在一方面，提供包含0.5％至2％的醛交联的壳聚糖以及抗原的组合物。在疫苗组合物中醛的终浓度不高于0.5％。

在另一方面，提供佐剂组合物，其包括连接至壳聚糖的碳水化合物以形成希夫碱。所述佐剂可以与抗原组合。所述碳水化合物可以是甘露糖。

在又一方面，提供疫苗制剂。疫苗制剂可包括本文提供的佐剂和抗原。所述抗原可以是蛋白或自然中的微生物，合适的微生物包括细菌、酵母、或其它真菌、真核寄生虫以及病毒，其可被减毒、重组、失活(killed)或者灭活(inactivated)。

在还一方面，本文提供制备佐剂和疫苗组合物的方法。在乙酸溶液中溶解壳聚糖以及添加抗原至溶解的壳聚糖。最后，使用醛将抗原和壳聚糖组合起来以使醛的终浓度在0.02％和0.5％之间。可向佐剂加入Tris来淬灭游离醛以产生更稳定的佐剂。

在再一方面，还提供增强受试者对抗原免疫应答的方法。所述方法包括向受试者施用本文所公开的包含抗原和基于壳聚糖的佐剂的疫苗制剂。所述基于壳聚糖的佐剂可以是醛交联的壳聚糖或碳水化合物连接的壳聚糖。

附图说明

图1显示在使用所述疫苗佐剂制剂初次接种疫苗以及加强后在火鸡中的抗β- 半乳糖苷酶IgG抗体应答。不同的字母表示显著性差异(p≤0.05)。

图2显示在一次加强后针对败血梭状芽胞杆菌(CS)的抗体水平，其显示在使用所述疫苗佐剂制剂初次接种疫苗以及加强后在火鸡中的败血梭状芽胞杆菌 (Clostridiumsepticum)IgG抗体应答。不同的字母表示显著性差异(p≤0.05)。