[发明专利]一种确定硫自养反硝化菌生物膜最适保存温度的方法

权利要求书

1.一种确定硫自养反硝化菌生物膜最适保存温度的方法，其特征在于，所述方法是利用流式细胞术测定不同温度保存的硫自养反硝化菌生物膜的细胞活性状态，将细胞活性状态最接近硫自养反硝化菌中试运行的细胞活性状态的保存温度确定为最适保存温度；所述硫自养反硝化菌生物膜细胞活性状态的测定包括活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞和死细胞的含量测定；

所述流式细胞术确认最适保存温度的步骤包括：

(1)硫自养反硝化菌生物膜测试样液的制备：用缓冲液稀释硫自养反硝化菌生物膜样品，混合均匀后通过装有水滑石的过滤装置，过滤后的样品离心、留用上清液，然后使用预冷缓冲液吹洗细胞，重复离心和清洗两次，再取上清液作为样品，使用适量10x Annexin VBinding Buffer混匀制得；

(2)利用流式细胞仪测定各样液的细胞活性状态；

所述流式细胞仪测定各样液的细胞活性状态是在对照FITC Annexin V组加入0.5μlPI染色剂，对照PI组加入0.5μl FITC Annexin V，检测组加入0.5μl FITC Annexin V和0.5μl PI，混匀后室温下避光孵育10～20min，之后于流式细胞仪上机检测。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述缓冲液的pH为6.2～6.8。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述缓冲液与硫自养反硝化菌生物膜的稀释体积比为8～10：1。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述过滤装置还包括15～25μm孔径的尼龙膜。

5.根据权利要求1-4任一所述方法，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1-4任一所述方法，其特征在于，所述缓冲液包括39％v/v磷酸二氢钠和61.0％v/v磷酸氢二钠。

7.一种快速启动硫自养反硝化菌生物膜工程的方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求1-6任一所述方法确定最适保存温度，在最适保存温度下，将培养成熟的硫自养反硝化菌生物膜置于保存基质中进行保存，活性恢复后即可启动硫自养反硝化菌生物膜工程。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述保存基质的COD浓度为40～50mg/L,NH₄⁺-N浓度为0.3～0.5mg/L，NO₃^--N浓度为8～12mg/L。

9.一种污水处理的方法，其特征在于，所述是利用权利要求7所述方法快速启动硫自养反硝化菌生物膜工程。