[发明专利]一种检测细菌介导图水羟砷铁矾生成过程中基因表达动态变化的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测细菌介导图水羟砷铁矾生成过程中基因表达动态变化的试剂盒，其特征在于，包括一组用于实时荧光定量PCR技术检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌功能基因表达动态变化的核酸，所述功能基因包括亚铁氧化相关基因、EPS代谢基因和耐砷相关基因，所述核酸包括检测亚铁氧化相关基因coxB、coxA、rus、Acop、petA1、cyc2和cyc1的引物对，检测EPS代谢基因galU的引物对和检测耐砷相关基因arsH、arsB、arsC和arsR的引物对；其中，所述coxB的引物对如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，所述coxA的引物对如SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示，所述rus的引物对如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，所述Acop的引物对如SEQID NO.9和SEQ ID NO.10所示，所述petA1的引物对如EQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，所述cyc2的引物对如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，所述cyc1的引物对如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示，所述galU的引物对如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，所述arsH的引物对如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示，所述arsB的引物对如SEQ ID NO.21和SEQID NO.22所示，所述arsC的引物对如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示，所述arsR的引物对如SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示；

还包括内参基因对照引物对，所述内参基因对照引物对如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括：2×FastStartEssentialDNA Green Master。

3.一种检测细菌介导图水羟砷铁矾生成过程中基因表达动态变化的方法，其特征在于，采用实时荧光定量PCR技术检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌功能基因表达动态变化情况，其包括以下步骤：

(1)从培养不同时间段的嗜酸氧化亚铁硫杆菌培养液中提取RNA；

(2)对提取的所述RNA反转录合成cDNA；

(3)对合成的所述cDNA进行荧光定量PCR扩增；其中，荧光定量PCR扩增时，包括功能基因反应体系和内参基因反应体系，所述功能基因反应体系包括亚铁氧化相关基因、EPS代谢基因和耐砷相关基因中的任一种功能基因的引物对及反转录合成的cDNA，所述内参基因反应体系包含内参对照引物对如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列；

(4)放入荧光定量扩增pcr仪，由仪器检测生成得出Ct_功能基因与Ct_内参基因；

(5)相对表达量计算：以0h为参照组，不同时间段为实验组，以16srDNA为内参基因，真正的表达量为2^-△(△CT))，其中，△Ct 1＝Ct_{其他时间段功能基因}-Ct_{对应时间内参基因}，△Ct 2＝Ct_{参照组的功能基因}-Ct_{参照组内参基因}，△(△CT)＝△Ct 1-△Ct 2；

所述步骤(3)中，所述亚铁氧化相关基因的引物对包括检测coxB、coxA、rus、Acop、petA1、cyc2和cyc1的引物对，所述EPS代谢基因的引物对为检测galU的引物对，所述耐砷相关基因的引物对包括检测arsH、arsB、arsC和arsR的引物对；其中，所述coxB的引物对如SEQID NO.3和SEQ ID NO.4所示，所述coxA的引物对如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，所述rus的引物对如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，所述Acop的引物对如SEQ ID NO.9和SEQID NO.10所示，所述petA1的引物对如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，所述cyc2的引物对如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，所述cyc1的引物对如SEQ ID NO.15和SEQ IDNO.16所示，所述galU的引物对如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，所述arsH的引物对如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示，所述arsB的引物对如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示，所述arsC的引物对如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示，所述arsR的引物对如SEQ IDNO.25和SEQ ID NO.26所示。