[发明专利]一种北芪菇中黄芪苷的提取纯化与检验方法

说明书

本发明公开了一种北芪菇中黄芪苷的提取纯化与检验的方法，涉及北芪菇中活性物质提取纯化与检验领域，以70%的乙醇为提取剂，经微波超声波辅助萃取仪辅助处理后获得黄芪苷粗提取液，以氯仿、甲醇、乙酸乙酯、水混合溶液为展开剂，经薄层层析展开分离纯化黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，用色谱甲醇和超纯水作为流动相，用高分辨质谱仪准确测定样品分子质量信息（分子离子或碎片离子的质荷比），用红外检测其官能团，并分析了其分子结构，最后测定其旋光度、比旋光度和熔点。应用TLC‑MS‑IR串联技术检测北芪菇中的黄芪苷，能实现从微克量级的分离分析到克量级的分离制备，是一种操作简单、用时短，效率高的提取纯化与检测的方法。

技术领域

本发明涉及北芪菇中活性物质的提取纯化与检验领域，具体为一种北芪菇中黄芪苷的提取纯化与检验方法。

背景技术

北芪菇，担子菌门下伞菌目侧耳属平菇，将正北芪、多种中草药、农作物副产品作培养料，采用科学的配方和特殊的工艺多年培育而成的新型侧耳属平菇，是山西浑源富硒地区开发的新型食用菌。根据生物富集作用，北芪菇内含浑源黄芪的药理成分，在生长发育过程中对黄芪苷有一定程度的富集。北芪菇中含有多种人体必需的氨基酸、多糖蛋白、抗生素、牛黄酸、菌糖、多种酶、维生素以及硒元素，是全能营养型的食用菌，其营养成份远超于普通平菇，含有较高的食用价值和药用价值。北芪菇具有较强的生物转化作用，其重要的代谢产物，如蛋白多糖、抗生素、微量牛黄酸有抗肿瘤、抗菌消炎、降低血压和防治脑血管障碍等作用，菌多糖和甘露糖有益于调理胃肠作用，以及含有帮助消化的各种酶等。在补气固表、润肤、脱毒排脓、有强身健体、保护肝脏等有较为显著的作用，尤其是在治愈银霄病和其它瘙痒性皮肤病有特殊的功效。另外，北芪菇是一种能产生新型氨基酸的微生物，其丰富的赖氨酸（1.19g/100g）和硒（0.54ppm/100g）可能与吡咯赖氨酸和L-硒代半胱氨酸或L-硒-甲基硒代半胱氨酸的生物合成存在着密切的关系，有望在抑制肿瘤、抗氧化、辅助治疗心血管疾病、解毒排毒等方面进行开发。

近年我国对不同植物中的黄芪苷进行了各方面的研究，相继报道了黄芪苷有免疫调节、抗炎，降压，镇静镇痛，保肝护心，清除多种自由基等多方面的药理作用。关于黄芪中黄芪苷的提取及含量测定早有报道，但对产于山西浑源县北芪菇中黄芪苷的含量少有报道，如今北芪菇中黄芪苷的研究备受人们重视，有关黄芪苷的研究变成了科学界的热点。随着社会经济和科学技术的发展，黄芪苷的开发研究和应用范围会更广，开发前景会更好，从而促进医疗事业的发展。

北芪菇中的黄芪苷以黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷为主。黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ在抗氧化、调节免疫功能、保肝、抗病毒和对心脑血管等多方面具有显著作用。

黄芪甲苷为环阿尔廷型三萜皂苷类化合物，白色至淡黄色粉末，mp29510~29610e，CAS编号：83207-58-3，分子式为C₄₁H₆₈O₁₄，分子量为784.9702，熔点295.0～296.0℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮，难溶于氯仿、乙酸乙酯等弱极性有机溶剂，生物活性高，是黄芪的主要药理成份，是黄芪及含黄芪制剂的重要鉴定指标。黄芪甲苷对人体拥有非常高的药理作用，其在器官保护（尤其是肝脏、肺、心肌、肾脏、脑等器官）、免疫调节、抗细胞凋亡、抗炎抗病毒、抗糖尿病、清除自由基、抗衰老等方面具有广泛的药理作用。

黄芪苷的含量测定与检测曾尝试采用高效液相紫外检测器检测，但由于黄芪苷在紫外区仅有微弱的吸收，溶剂噪音对结果有较大影响，灵敏度低，测定误差大。索氏回流提取需要碱洗及大孔树脂富集过程，洗脱富集复杂，不易操作。此外，还有采用了水浸提法、碱水提取法、回流法、CO₂超临界流体萃取法等多种方法，但是这些方法均存在分离纯化量少，精度低，误差大的缺点，无法实现高精度的大量制备。

为解决北芪菇中黄芪苷的提取和黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和黄芪甲苷提取纯化的操作繁琐、结果不可靠的问题，本发明提供了一种易于操作、试验耗时短且提取效率高、实现从微克量级的分离分析到克量级的分离制备的北芪菇中黄芪苷提取纯化与检测的方法。