[发明专利]鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗及制备和使用方法

说明书

本发明涉及一种副溶血弧菌缓释口服疫苗的制备和使用方法，该缓释口服疫苗由饲料、灭活的副溶血弧菌菌液、缓释剂按比例10:1:3；制备步骤包括：⑴副溶血弧菌的培养和灭活、⑵口服疫苗的制备、(3)缓释口服疫苗的制备；本发明所涉及鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗的使用方法，其方法步骤包括：⑴首次免疫和⑵加强免疫。本发明制备了鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗，并采用口服免疫接种方法，免疫效果较好，工作量小，适合大规模接种，同时，本发明采用缓释材料对口服疫苗进行包被，可以有效延长疫苗的释放时间，抵抗抗原在胃和前肠被消化酶破坏和分解，使抗原顺利地到达后肠并产生免疫反应，获得较好的免疫效果。

技术领域

本发明属于养殖鱼类的疫苗及使用的技术领域，具体涉及一种鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗及制备和使用方法。

背景技术

我国海水养殖鱼类的病害呈逐年增加的趋势，尤其是弧菌病最为常见，造成了巨大的经济损失。目前国内治疗鱼类细菌性疾病主要是通过使用抗生素类药物，而预防细菌性疾病主要是采用消毒剂、水质改良剂、微生态制剂等方法改善养殖水体生态环境，疫苗的应用并不多见，主要原因是获得正式批文的水产疫苗很少，而且目前国内获得正式批文的疫苗都是注射型疫苗，尽管该类疫苗效果较好，但在免疫实施过程中，工作量大，操作繁琐，易对鱼体产生应激。

长期以来，使用抗生素治疗鱼类病害，使得致病菌耐药性增强，并且造成环境污染以及药物残留等水产品质量安全问题。国家对养殖废水排放加大了监管力度，超标排放养殖废水的企业将面临巨额罚款或关停的风险。国家已经命令禁止使用危害严重的药物，为了有效保护水域生态安全和提高水产品质量，水产养殖生产中应尽量减少药物的使用。

利用疫苗预防疾病在畜禽动物养殖上已经应用广泛，但在水产养殖中规模较小，这与鱼类生活在水中的特殊性有关。目前，国内市售的渔用疫苗都为注射疫苗，渔用注射疫苗存在操作困难、过程繁琐、工作量大、伤口容易感染等问题。口服免疫具备安全易行、操作方便、使用量小、不受鱼类个体大小限制等优势，适宜在生产上推广应用。但口服疫苗面临一个重要的问题，即在口服免疫过程中免疫原容易被胃酸和消化酶破坏以及在前肠被分解吸收导致其免疫效果不佳。

关于副溶血弧菌口服疫苗的研究，现有技术主要有两方面的报道

(1)采用药用淀粉为载体、以丙烯酸树脂为包膜材料制备了副溶血弧菌、溶藻弧菌和迟缓爱德华氏菌三联口服疫苗，免疫大菱鲆保护率达50％。

(2)采用乳化、离子交联法以壳聚糖和海藻酸钠为包被材料制备了副溶血弧菌外膜蛋白K微球口服疫苗，口服免疫大黄鱼免疫保护率达60％；采用乳化—溶剂挥发法以丙烯酸树脂、卵磷脂和液体石蜡为乳化剂制备副溶血弧菌的外膜蛋白K和鞭毛蛋白A的融合蛋白微球口服疫苗，免疫黑石斑鱼，保护率达到50％。

上述两个方法存在的不足是：方法(1)采用药用淀粉为载体、以丙烯酸树脂为包膜材料制备了副溶血弧菌、溶藻弧菌和迟缓爱德华氏菌三联口服疫苗，诱食效果比较差；方法(2)需要提取外膜蛋白，而外膜蛋白含量低，提取较为困难，采用乳化法制备外膜蛋白的微球疫苗工艺复杂、耗时耗力，生产成本较高，难以大规模推广应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗及制备和使用方法。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗及制备，该缓释口服疫苗由商品化饲料、浓度为6×10¹⁰cfu/mL的副溶血弧菌菌液、缓释剂按比例10:1:3，单位为：克:mL:mL配制而成。

而且，所述副溶血弧菌菌液经过了0.5％的甲醛灭活。

鱼源副溶血弧菌缓释口服疫苗及制备，其特征在于：该制备过程的方法如下：

⑴灭活：使用0.5％的甲醛对副溶血弧菌菌液进行灭活；

⑵疫苗制备：