[发明专利]甲基营养型芽孢杆菌BMF 04与发酵方法及用途

说明书

本发明是一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BMF 04，其保藏号为CCTCC NO：2017375。本发明还公开了甲基营养型芽孢杆菌BMF 04对植物病原真菌的抑制用途、菌株的无菌发酵液对植物病原真菌的抑制用途、菌株的无菌发酵液为有效成份制成抑细菌药物的用途、对黄瓜幼苗促生长用途；同时公开了甲基营养型芽孢杆菌BMF 04的无菌发酵液的制备方法和产抑菌物质发酵培养方法；还公开了甲基营养型芽孢杆菌BMF 04产芽孢固态发酵培养方法。本发明针对农作物中常见的病原菌，筛选出新的具有广谱抗性的的海洋细菌菌株，并采用菌株形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析确定了优良抗性菌株的种属关系。同时还研究了其抗菌用途，为菌株的应用提供了方向。

技术领域

本发明涉及一种海洋细菌，特别是一种甲基营养型芽孢杆菌BMF 04，本发明还涉及其用途与发酵方法。

背景技术

生物防治具有不污染环境、对人和其他生物安全、防治作用持久、产品无残留等优点，能够弥补化学农药带来的不足，筛选更多的抑菌作用强、促进作物生长的优良菌株显得尤为重要。现有用于开发微生物农药的微生物菌株主要来源于陆源环境，源自海洋的微生物菌株的开发研究起步较晚，海洋细菌生长繁殖快、代谢产物丰富，是筛选抗性菌株的重要种质资源。不同学者从海洋中分离得到多个具有强抗菌作用的海洋细菌优良菌株。朱晓飞等筛选出菌株YB-3，其对水稻纹枯病菌具有强烈抗菌作用，通过形态学观察、生理生化试验、Biolog鉴定技术及16S rDNA序列分析鉴定其为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)；蒋学兵等利用8种增菌液，11种培养基，自中国4大海域水样中分离到72株细菌与411株真菌，分别为革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌、真菌和弧菌，其中弧菌为其优势菌。利用VITEK全自动微生物鉴定仪、API微生物鉴定系统和BIOMIC检测仪和微量生化反应管对弧菌进行鉴定，结果表明弧菌主要为霍利斯弧菌、溶藻弧菌、麦氏弧菌、河流弧菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌等；骆祝华等从不同海域中分离到480 株海洋细菌，包括107株粪大肠杆菌和150株芽孢细菌，其中117株海洋细菌具有抑菌活性，且来自不同区域不同样品的菌株，其抑菌活性有很大差别，红树林区域的生物样品的抗菌率很高，其有望成为筛选优良抑菌菌株的来源地；Yoo等分离了一株海洋细菌菌株PT-1，经16S rRNA序列测定、进化树分析和脂肪酸分析表明菌株PT-1为海洋单胞菌属 (Marinomonas arctica)的新菌种，可产生蛋白酶。目前关于海洋细菌的研究主要处于实验室筛选阶段，对于菌株的发酵及其应用较少。因此，从海洋细菌中筛选新的抗性菌株并加以利用具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对目前应用化学农药防治植物病害所出现的农药残留、环境污染、有害生物产生抗药性等问题，生物农药能够弥补化学农药的不足，但市场上生物农药种类少不能满足生产需要等现有技术的不足，提供一种有较强抗菌作用具有生物农药和肥料开发应用前景的新的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BMF 04。

本发明所要解决的另一技术问题是针对生产过程中需节约成本、提高发酵效率的现状提供了前述甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BMF 04的低成本、高效的发酵方法。

本发明所要解决的再一技术问题是提供了前述甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BMF 04的用途。

本发明是一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BMF 04，其特点是：其保藏号为CCTCC NO：2017375。本发明涉及的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus) BMF 04菌株(以下简称BMF04菌株或者BMF04)已由申请人于2017年6月26日保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号为CCTCC NO：M2017375。保藏单位地址为：中国武汉市武汉大学，邮编430072，电话027－68754052。