[发明专利]一种天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜指纹图谱的构建方法及鉴别应用

说明书

本发明公开了一种天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜指纹图谱的构建方法及鉴别应用。本发明通过采用顶空固相微萃取‑气相色谱‑质谱联用的方法和中药指纹图谱相似度评价系统分别构建得到天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜的GC/MS指纹图谱；确定天然中蜂龙眼蜜的GC/MS指纹图谱中含有16种共有特征挥发性成分，天然意蜂龙眼蜜的GC/MS指纹图谱中含有15种共有特征挥发性成分。通过比对待测天然龙眼蜜样品总离子色谱图与已构建GC/MS指纹图谱的相似度和化学组成差异，从而准确区分鉴别天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜。本发明的方法具有样品用量小、特征性强、结果可靠的特点，十分有益于解决当前市场上存在中意蜂龙眼蜜难以辨别的问题，具有非常明显的社会效益。

技术领域：

本发明属于蜂蜜区分检测领域，具体涉及一种天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜指纹图谱的构建方法及鉴别应用。

背景技术：

蜜源植物花蜜的挥发物是蜂蜜香味物质的重要来源，不同蜜源植物来源的蜂蜜或添加了不同物质的假蜂蜜常含有不同的挥发性成分(Vilma et al.,2008；任佳淼等，2016)。蜂蜜的挥发性成分色谱指纹图谱(Chromatographic fingerprint)是指能够鉴别不同蜜源植物或不同地区来源蜂蜜样本间差异的色谱图谱(Konstantinosa et al.,2010；Jasicka-Misiak et al.,2018)。这种色谱图谱多态性丰富，且具有高度的蜂蜜品种特异性和地区稳定性的特点。对于单花蜜而言，由于同种蜜源植物具有整体的遗传相似性，因此利用蜂蜜的挥发性成分色谱指纹图谱可进行准确鉴别(Soares et al.,2017)。如夏立娅等(2010)利用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法建立了由14个共有峰组成的枣花蜂蜜挥发性成分指纹图谱。涂世等(2011)则采用超声波辅助萃取法，并结合气相-氢火焰化离子检测和气相色谱-质谱联用技术建立了油菜单花蜜的挥发性成分指纹图谱。

龙眼蜜，又称“桂圆蜜”，是蜜中上品，主要分布于我国华南地区，以及台湾地区，如海南、广东、广西、福建等省，呈琥珀色，食味甘甜，不易结晶，因其具有特殊的养血安神和补中益气等功效而深受消费者的偏爱。然而，由于当前天然龙眼蜜标准化的质量控制指标的缺乏，导致市场上依然存在诸多劣质或掺假蜜；且同时由于国内市场上天然中华蜜蜂(Apiscerana cerana，中蜂)蜂蜜的价格是天然意大利蜜蜂(A.mellifera ligustica，意蜂)蜂蜜的3-5倍，在利益驱使下，市场上亦常出现使用天然意蜂龙眼蜜掺入或冒充天然中蜂龙眼蜜的现象，给中蜂的养殖者及其相关蜂产品的加工企业带来了较大损失，也容易引发消费者的信任危机(胡福良等，2016)。目前，国内外尚无有关利用天然中意蜂龙眼蜜GC/MS指纹图谱区分鉴别天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜的相关报道，对天然中意蜂龙眼蜜的区分主要停留在消费者或蜂农的人为主观区分，这些方法主要依靠经验、主观性大，无法对天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜进行科学鉴别。因此，生产上亟需一种科学的方法来区分鉴别这两种龙眼蜜，以在一定程度上遏制市场上以低价天然意蜂龙眼蜜冒充或掺入高价天然中蜂龙眼蜜的乱象。

发明内容：

本发明的目的是为了提供一种天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜指纹图谱的构建方法及鉴别应用。

本发明的第一个目的是提供一种天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：通过采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用的方法和中药指纹图谱相似度评价系统分别构建得到天然中蜂龙眼蜜和天然意蜂龙眼蜜的GC/MS指纹图谱；对指纹图谱中各色谱峰对应的质谱图进行多点校正和峰匹配分析，确定天然中蜂龙眼蜜的GC/MS指纹图谱中含有16种共有特征挥发性成分，天然意蜂龙眼蜜的GC/MS指纹图谱中含有15种共有特征挥发性成分。