[发明专利]一种用于检测真菌感染的试剂组、试剂盒以及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测真菌感染的试剂组、试剂盒以及检测方法，涉及生物技术领域。该试剂组包括如下试剂中的一种或两种的组合：PCR缓冲液和复合酶制剂；其中，PCR缓冲液含有如下成分：醋酸钾、MgCl₂、甘油、DMSO、Tween‑20以及PEG‑200；复合酶制剂含有如下成分：蜗牛酶、溶菌酶、木瓜蛋白酶以及漆酶。采用该试剂组可直接对样品例如血液进行检测，不需要对样品进行核酸提取纯化处理等步骤，具有灵敏度高、特异性好及检测时间短等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于检测真菌感染的试剂组、试剂盒以及检测方法。

背景技术

恶性血液病是指血液系统恶性肿瘤，包括各种类型白血病、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、骨髓增生异常综合征等。这类患者由于机体免疫功能紊乱，以及治疗过程中广泛使用糖皮质激素、细胞毒性药物、免疫制剂，加之广谱抗生素的使用及侵袭性操作增多，使得侵袭性真菌病(invasive fungal disease,IFD)的发生率呈逐渐增高趋势。国内近期一项多中心流行病学研究统计显示，重症监护病房内患者的发病率约占8％～15％，器官移植受者的发病率为20％～40％，血液系统肿瘤患者的发病率高达约31％。

侵袭性真菌病，又称侵袭性真菌感染，是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。

其中最常见的感染病原菌是以念珠菌为主的酵母样真菌和以曲霉为主的丝状真菌，分别占到70％～90％和10％～20％。然而，由于真菌感染无特征性临床表现，实验室及影像学检查受到特异性及敏感性限制，早期诊断困难，容易误诊漏诊，延误治疗，使得IFD成为恶性血液病患者的重要死亡原因之一。

早期诊断是成功治疗真菌感染的关键，目前确诊侵袭性真菌病的金标准除了隐球菌的乳胶凝集试验以外都是传统检测方法。而依靠传统的微生物或病理学方法诊断侵袭性真菌病，检测敏感性低，无法进行有效早期诊断。因此，针对侵袭性真菌病的早期诊断，需尽快开发出快速、特异且易于操作的检测方法和试剂，是目前临床上病原真菌检测研究迫切需要解决的重要问题。

分子生物学检查是目前国内外真菌感染诊断及研究的热点，特异性强、灵敏度高，是深部真菌感染早期诊断的大趋势。PCR诊断在侵袭性念珠菌病的诊断方面比血培养敏感快捷，同时又能弥补GM试验检测的假阳性及假阴性。但分子生物学方法成本较高、操作复杂、未标准化，还未大规模用于临床。目前，市面上关于真菌检测多为培养法或真菌(1-3)-β-D-葡聚糖检测试剂盒，暂无其他相关检测方法的成熟试剂盒，其中关于培养法检测试剂盒，结果准确率高，但耗时长，无法对受试者进行快速有检测；真菌(1-3)-β-D-葡聚糖检测试剂盒，即检测的是真菌的细胞壁成分，该方法可应用于IFD早期感染检测，但在如下情况检测易出现假阳性(1)使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；(2)静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；(3)链球菌血症；(4) 操作者处理标本时存在污染。另外，使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性，食用菌类，如蘑菇等食物可以导致假阳性。因而检测结果误差较大，假阳性率高，可信度低。

基于此，提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测真菌感染的试剂组，采用该试剂组可直接对样品例如血液进行检测，无需对样品进行核酸提取纯化处理等步骤，具有灵敏度高、特异性好及检测时间短等优点。

本发明的另一目的在于提供一种检测真菌感染的试剂盒，采用该试剂盒可直接对样品例如血液进行检测，且不需要对样品进行核酸提取纯化处理等步骤，与传统检测方法相比，具有操作方便、灵敏度高、特异性好及检测时间短、还可初步确定阳性样本中真菌感染的类型，具有显著优势，更便于实际应用推广等优点。