[发明专利]一种凝集素探针组合在基于尿蛋白糖型鉴别秦岭川金丝猴妊娠方面的应用

说明书

本发明提出一种凝集素探针组合在基于尿蛋白糖型鉴别秦岭川金丝猴妊娠方面的应用。该凝集素探针组合为PSA、BS‑I、GSL‑II、DBA和PHA‑E+L的组合；若样本检测结果为PSA、BS‑I和GSL‑II表达上调，且DBA和PHA‑E+L表达下调，则表明相应主体在取样时处于妊娠期。利用本发明对秦岭川金丝猴妊娠状况进行鉴别，快速、简便、准确，实现成本较低。

技术领域

本发明涉及一种鉴别秦岭川金丝猴妊娠的方法。

背景技术

金丝猴隶属灵长目(Primates)猴科(Cercopithecidae)疣猴亚科(Colobinae)仰鼻猴属(Rhinopithecus)，川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)是金丝猴的指名亚种，为中国的特有物种，属国家I级重点保护动物。作为珍稀濒危灵长类，国内外各大动物园都有饲养，通过繁育扩大种群数量，从而将濒危物种就地保护或者迁移到合适的环境中，也为濒危物种野外放归提供可能，提高动物的繁殖能力是其关键所在。但因存在雄猴对怀孕雌猴强行重复交配、抢夺食物，怀孕母猴妊娠早期特征不明显，不能及时对妊娠母猴进行保护，导致人工饲养繁殖过程中流产死产现象严重,极大的影响了繁殖率。

川金丝猴的繁殖具有明显的季节性，8‐12月为交配季节，产子期次年3‐5月，孕期6‐7个月，动物妊娠诊断主要分为两类(直接和间接)或三类：一是视觉方法，二是临床方法，三是实验室检查，但因取样过程需要麻醉和反复抓捕动物，会扰乱动物体内激素的正常分泌及循环和新陈代谢过程等、监测周期长、监测指标波动水平大、具有延时性等因素，现阶段也没有能尽早确诊珍稀野生动物怀孕的简单易行的方法。

糖基化是最普遍的蛋白质翻译后修饰之一，研究发现约一半以上的哺乳动物蛋白质都发生了糖基化。糖基化作为一种重要的翻译后修饰，可以影响蛋白质的溶解度、折叠、定位及构象的维持，调节蛋白质的功能和降解；还可以介导分子与分子之间、分子与细胞之间、细胞与细胞之间的相互作用，参与几乎所有的生命过程。尿液由于蛋白质成分相对简单，尿液糖蛋白质组学的研究能够有效地去除非糖基化修饰的白蛋白，在尿液中糖基化可以寻找到更多有意义的低丰度糖蛋白，因此在对人的生理变化、疾病诊断当中发挥更大的作用。修饰的改变主要包括两个方面：1)多肽链上糖基化结合位点的改变；2)寡糖链结构的改变。研究发现，在妊娠过程中，血清中糖基化发生了改变，在有糖尿病、肾病等疾病妊娠患者中发生异常变化。

不过，目前糖基化改变在妊娠的发展还没有一个完整的了解，这些改变或许对妊娠诊断的指示有所帮助。

生物芯片现已成为快速、高效、高通量取得相关信息的重要手段。随着糖生物学及糖组学研究的进展，糖芯片正发展成为糖生物学及糖组学新兴的检测工具。凝集素芯片检测样品用量少、高通量、灵敏度极高，并且可以与多种检测手段整合使用，可以快速、准确检测出待测样本中糖蛋白糖链的差异，因而可大大提生物芯片结果检测、分析的速度和效率。

凝集素芯片是通过固定于芯片上的凝集素探针与样品中糖蛋白糖链特异性结合，可以高通量地检测出样品中糖蛋白糖链结构和连接方式的变化，是研究糖蛋白糖链结构变化最有效的分析工具之一。

发明内容

本发明的目的在于获得一种简便、准确的鉴别秦岭川金丝猴妊娠的方法，申请人最终通过对秦岭川金丝猴的尿液糖蛋白糖链进行大量的分析、实验，提出了一种特定凝集素探针组合，可用于快速鉴别尿液中糖蛋白糖链的变化，以此有效鉴别秦岭川金丝猴的妊娠状况。

该特定凝集素探针组合是PSA、BS-I、GSL-II、DBA和PHA-E+L的组合。当样本检测结果为PSA、BS-I和GSL-II表达上调，且DBA和PHA-E+L表达下调，则表明相应主体在取样时处于妊娠期。

该凝集素探针组合可用于制备基于尿蛋白糖型鉴别秦岭川金丝猴妊娠的试剂盒，试剂盒中的凝集素芯片上点制有所述凝集素探针组合。

进一步的，凝集素芯片上可以增加凝集素LTL和WGA作为内参。