[发明专利]一种快速核酸提取方法

说明书

本发明公开了一种快速核酸提取方法，该方法包括以下步骤：步骤一、裂解核酸样品：将含有核酸的样品加入裂解液中，形成核酸裂解液；步骤二、吸附核酸：将载体加入所述核酸裂解液中，得到吸附核酸的载体；步骤三、除去杂质：将吸附了核酸的载体在漂洗液中漂洗，除去除核酸外的杂质；步骤四、扩增反应：将漂洗后的吸附有核酸的载体直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应；所述载体为纤维素滤纸；本发明提供一种简单、快速、基于纤维素滤纸为载体中提取核酸，适用于聚合酶链反应扩增和重组酶聚合酶恒温扩增等核酸扩增技术，适用在室温运行，适用于各种来源的生物样品，可以将载有核酸的纤维素滤纸直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应，整个过程耗时少。

技术领域

本发明涉及核酸提取领域，特别涉及一种快速核酸提取方法。

背景技术

对于利用核酸扩增技术进行分子诊断的主要挑战是扩增前含核酸材料的预处理以及繁杂的核酸提取步骤。目前广泛使用的基于二氧化硅和基于磁珠的技术存在着诸多缺陷，包括效率过低(≤10％)；还有需要针对特定靶标类型进行优化，造成一种样品类型的提取过程通常与其它样品类型不相容；而利用酚氯仿的方法虽然回收率高，但是由于提取液组分的毒性高而限制了其使用范围；基于去污剂的方法溶解过程简单，但需要进行高温变性(95℃)处理，另外由于反转录酶不是热稳定的，因此不适用于单步骤RT-PCR。重要的是，现行的所有方法均需要进行反复的离心，提取步骤繁杂、耗费时间长、需要特定的设备。

本申请中我们描述了一种避免此提取过程复杂性的方法，在简单、快速、基于纤维素滤纸的系统中提取足量的核酸，适用于PCR、RPA等核酸扩增技术的使用，所述系统在室温运行，适用于各种来源的生物样品，并且可以将载有核酸的纤维素滤纸直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应，整个过程小于1分钟。

发明内容

发明的目的在于提供一种快速核酸提取方法，解决了提取过程复杂、耗费时间长以及需要特定设备的问题。

本发明是这样实现的，一种快速核酸提取方法，该方法包括以下步骤：

步骤一、裂解核酸样品：将含有核酸的样品加入裂解液中，形成核酸裂解液；

步骤二、吸附核酸：将载体加入所述核酸裂解液中，得到吸附核酸的载体；

步骤三、除去杂质：将吸附了核酸的载体在漂洗液中漂洗，除去除核酸外的杂质；

步骤四、扩增反应：将漂洗后的吸附有核酸的载体直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应；

所述载体为纤维素滤纸。

本发明的进一步技术方案是：所述纤维素滤纸的形状为圆形或/和多边形，所述纤维素滤纸的面积大小不超过9mm²。其作为核酸吸附载体未经过任何处理与修饰，这与其它已经公布的发明中通常将核酸吸附载体经过各种不同的处理与修饰是截然不同的且过大的面积反而会大幅降低核酸释放效率，从而影响后续核酸扩增效果。

本发明的进一步技术方案是：所述裂解液包括盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris、Tween20、NaCl、TritonX-100、EDTA、PVP、柠檬酸钠、月桂肌酸钠以及β巯基乙醇中的至少3种，其中Tris的PH值为8.0。保证DNA、RNA释放到溶液中。

本发明的进一步技术方案是：所述裂解液包括1.5M盐酸胍、4M异硫氰酸胍、50mMTris、1％Tween20、100mM-150mM NaCl、0.5％TritonX-100、5mM EDTA、2％PVP、25mM柠檬酸钠、0.5％月桂肌酸钠以及0.1mMβ巯基乙醇中的至少3种。

本发明的进一步技术方案是：所述裂解液分为DNA裂解液和RNA裂解液。

本发明的进一步技术方案是：所述DNA裂解液为盐酸胍、Tris、Tween20、NaCl、TritonX-100、EDTA以及PVP中的至少3种，其中Tris的PH值为8.0。