[发明专利]一种相隔离的油包水透明粗乳液及其应用

说明书

一种相隔离的油包水透明粗乳液及其应用，其中该透明粗乳液由水相和油相乳化分散得到，其中分散于油相中的水相液滴其平均直径不低于0.2μm；并且，水相中还溶解有折射率增强剂，该折射率增强剂成分在所述水相整体中所占的质量百分数不低于20％；所述油相中还溶解有HBL值不大于8的表面活性剂；此外，所述水相和所述油相两者折射率之差的绝对值不超过0.1。本发明通过控制用于相隔离的油包水粗乳液的水相和液相两者的组成，尤其通过调整粗乳液液滴中水相的折射率，使粗乳液液滴透明化，使光线可以穿过浅层透明液滴达到深层液滴，从而实现深层粗乳液液滴的原位封闭成像检测。

技术领域

本发明属于数字链式酶反应检测技术领域，更具体地，涉及一种相隔离的油包水透明粗乳液及其应用，该相隔离的油包水透明粗乳液尤其是一种水油两相物质隔离的稳定的透明粗乳液，并且应用该透明粗乳液系统可实现数字定量检测，相应的检测方法尤其可以实现高特异性数字式封闭核酸定量检测。

背景技术

数字链式酶反应是目前世界上最灵敏和精确的核酸定量方法。其中的数字式检测，是指将待测含有目标物，如核酸、蛋白质等生物大分子，或者细菌、细胞等的溶液或者悬浮液分隔成一个个彼此隔绝但是体积相同的独立反应空间，从而让目标被随机分散在这些微反应器中独立进行检测反应。当待测目标的个体数与微反应器数目相当或者前者小于后者时，就会出现部分的微反应器出现阳性信号而其余的则是阴性(由于此分隔内不含目标物)。待数出阳性分隔的数目就可以利用泊松分布统计模型算出待测物的浓度。虽然链式酶反应作为最常见的检测反应应用最广，由于该反应是热循环的，要求较为精密的变温控温设备；而环介导扩增、滚环扩增、重组聚合酶扩增、多重置换扩增等恒温反应也因为反应灵敏、操作简单、设备要求低，在许多场景中得到应用。数字式的检测由于可以在单个核酸分子、单个蛋白分子或者单个细胞、细菌级别上定量，可以说是最为准确的定量手段，同时可以区分核酸序列中单个碱基的区别，在许多场景中有明显优势。

为提高数字链式酶反应的反应通量，需要设置多个独立的反应空间。目前已有多种能够形成独立反应空间的手段，其中有利用微流控芯片等微加工器件做出微米级别的微坑等“硬分隔”，用油包水形成的均匀液滴的“软分隔”。后者由于简便容易操作、成本低廉，逐渐在科研与实际应用中占据更大的市场份额。在“软分隔”中，乳液液滴是化学生物领域中实用并且正在迅速发展的有力工具之一，在生命科学和材料领域应用众多。乳液液滴的尺寸通常在数微米到几百微米之间，在特定表面活性剂的作用下稳定存在于油相液体中。由于当前手段限制和技术惯例等原因，科研以及生产中的乳液液滴一般处于1微米到300微米之间。乳液液滴能够将样品液滴(多为水溶液)均匀的分散为多份体积近乎相同的分隔，这些相互隔绝的分隔能够形成独立的反应空间，从而可以极大的提高反应的通量，可以用于合成微小尺度的并且数目众多的结晶颗粒、聚合物小球等，形成的固态颗粒物大小相近，并且合成过程容易调控。