[发明专利]诱导星形胶质细胞转分化为五羟色胺能神经元的方法及应用

权利要求书

1.一种诱导星形胶质细胞转分化为五羟色胺能神经元的方法，包括：在星形胶质细胞中表达选自下组的转录因子：(a)Ascl1/Mash1，Gata2，Foxa2，Lmx1b和Nkx2.2；或(b)Ascl1/Mash1，Gata2，Foxa2和Lmx1b；培养该细胞，从而所述星形胶质细胞转分化为五羟色胺能神经元。

2.一种诱导星形胶质细胞转分化为五羟色胺能神经元的方法，包括：

(1)在星形胶质细胞中表达以下转录因子：Ascl1/Mash1，Gata2，以及选自Foxa2、Lmx1b和Nkx2.2中的任意两种或三种；

(2)在添加化合物的条件下诱导培养(1)的细胞，从而所述星形胶质细胞转分化为五羟色胺能神经元；其中，所述化合物包括：Y27632，PD0332991，神经营养因子GDNF，神经营养因子BDNF，Dorsomorphin，SB431542。

3.如权利要求2的方法，其特征在于，所述的Dorsomorphin，SB431542在诱导培养的前9±2天，较佳地前9±1天添加。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的化合物的终浓度为：

Y27632：10±5μM，较佳地10±2μM；

PD0332991：1±0.5μM，较佳地1±0.2μM；

神经营养因子GDNF：20±10ng/ml，较佳地20±5ng/ml；

神经营养因子BDNF：20±10ng/ml，较佳地20±5ng/ml；

Dorsomorphin：0.5±0.25μM，较佳地0.5±0.15μM；

SB431542：5±2.5μM，较佳地5±1.5μM。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，诱导培养的培养基中，还包括：B27添加物、血清、上皮生长因子EGF、成纤维细胞生长因子FGF2。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，各组分的终浓度为：

血清：按照体积10±5％；较佳地10±2％；

上皮生长因子EGF：10±5ng/ml；较佳地10±2ng/ml；

成纤维细胞生长因子FGF2：10±5ng/ml；较佳地10±2ng/ml；

B27添加物：1±0.5倍量。

7.如权利要求2～6任一所述的方法，其特征在于，所述的细胞培养基中，以选自下组的培养基作为基础培养基：DMEM、MEM、RPMI、Neuronal basal或Fischer；较佳地，所述的DMEM选自：DMEM/F12，Advanced DMEM/F12。

8.由权利要求1～7任一所述的方法获得的五羟色胺能神经元培养物或从该五羟色胺能神经元培养物中分离纯化的五羟色胺能神经元。

9.如权利要求8所述的五羟色胺能神经元培养物或分离纯化的五羟色胺能神经元，其特征在于，所述的五羟色胺能神经元通过在星形胶质细胞中表达权利要求1的(b)组的转录因子而获得，其具有下组的性能或特征：呈现不成熟的电生理特性；或

所述的五羟色胺能神经元通过在星形胶质细胞中表达权利要求1的(a)组的转录因子而获得，其具有下组的性能或特征：呈现成熟的电生理特性，产生复杂的神经元形态和电生理特性；或

所述的五羟色胺能神经元通过权利要求2所述的方法获得，其具有下组的性能或特征：呈现成熟的电生理特性，产生复杂的神经元形态和电生理特性。

10.权利要求8或9所述的五羟色胺能神经元培养物或分离纯化的五羟色胺能神经元的用途，用于：

制备预防、改善或治疗神经系统疾病的药物；或

用于作为体外模型，进行神经系统疾病的模拟及其药物的筛选；或

用于制备体内细胞移植的组合物。