[发明专利]用于穿山甲亲子鉴定的SSR荧光标记引物及应用

权利要求书

1.用于穿山甲亲子鉴定的SSR荧光标记引物，其特征在于，所述引物为：

M13MJ-F2 F: TTTCATACCGGGAAGTCCAC; R: ATGGTCCTAACACCACGGAG；

M13MJ-F3 F: CACCTGCATGTACCCCTTTT; R: CCCCCTCAAAATACCACCTT；

M13MJ-F4 F: GAGAGAAAGGGGAAAATCGG; R: TGATAGGATGTGAGGAGGGG；

M13MJ-F5 F: TGGGGTCTGCTGTTTTCATT; R: CTCCCTCTGTAGGTTGCCCT；

M13MJ-F7 F: AGAAGTGATTTGCACCCCTG; R: CAGTGGCCAGAATGGAGATT；

M13MJ-F8 F: GTCATGCATGGAAGACAGGA; R: GTCTGGCTGAAATGGAAAGG；

M13MJ-F9 F: CCCTATGAGGTGGGCACTAA; R: AACTCCATCAAAGGTGTGGC；

M13MJ-F10 F: CCCAGATCCAAAATGAATGG; R: TGCTGATGTTCACTCTTGCC；

M13MJ-F11 F: ATCCACCTAGGAACCTCAGC; R: GACTCTTCGGGATTTCACACA；

M13MJ-F12 F: ATCCACCTAGGAACCTCAGC; R: GACTCTTCGGGATTTCACACA；

M13MJ-F16 F: TTCCCTTCATCTGTTTTGCC; R: CAGCACTGCCAAGGTCTGTA；

M13MJ-F17 F: GTAATGGGGTATGTGGTGGG; R: TCCCTGTTCAAACGGAATTT；

M13MJ-F20 F: CAGTGCTCATCACATAGCAGG; R: CATGCCTAGTGTTTCACGTTG

M13MJ-F24 F: TTCAGCCAGGGTCTCTCAGT; R: TGGGGTTTTTCCTCAATCTG；

M13MJ-F25 F: CCAGAGAAAGGTAGGAGCCA; R: TCCAGAAAACAGACCCAAGG。

2.权利要求1所述的引物在穿山甲亲子鉴定中的应用。

3.权利要求1所述的引物在制备穿山甲亲子鉴定试剂盒中的应用。

4.一种穿山甲亲子鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、合成权利要求1引物对正向5’端加M13接头的正向引物，所述的M13接头序列为CACGACGTTGTAAAACGAC；合成通用引物M13的正向5’端添加荧光基团的正向引物；所述的通用引物M13的正向引物序列为CACGACGTTGTAAAACGAC；

B、提取穿山甲DNA作为模板，使用权利要求1引物对正向5’端加M13接头的正向引物、反向引物、通用引物M13的正向5’端添加荧光基团的正向引物，进行PCR扩增，对PCR产物进行基因型判定，采用Cervus软件计算等位基因数，观测杂合度与期望杂合度，哈迪温伯格平衡检验，多态信息含量、单独排除率和累积排除率，根据基因型分析结果联合使用排除法与似然法进行亲子关系的鉴定。

5. 根据权利要求4所述的穿山甲亲子鉴定的方法，其特征在于，所述的PCR扩增程序采用降落PCR，具体条件为：95 ℃预变性10 min；95 ℃变性15 s；退火温度30 s从62至52 ℃，每2个循环降退火温度2 ℃，72 ℃延伸2 min；95 ℃变性15 s；52 ℃退火温度30 s；72 ℃延伸2 min；30个循环； 72 ℃延伸10 min。