[发明专利]一种构建病原感染敏感性动物模型的方法

说明书

本发明属于实验动物及医学研究领域，公开了一种构建病原感染敏感性动物模型的方法，通过基因沉默技术抑制动物Ager基因的表达。该方法利用基因沉默技术，建立了固有免疫受体Ager基因表达下调的动物模型，可利用该模型进行病原感染实验，提高了动物对病原的易感性，同时对于一般免疫指标没有显著影响。从而有助于感染性疾病感染机制研究及药物开发。

技术领域

本发明属于实验动物及医学研究领域，具体涉及一种构建动物模型的方法，尤其是涉及一种构建病原感染敏感性动物模型的方法。

背景技术

实验动物是医学研究的重要载体，特别是感染性疾病的研究。建立各类病原的实验动物感染动物模型是进行感染性疾病致病机理研究以及药物开发的重要过程。这其中小鼠作为遗传背景等较为清楚的模式动物，因而成为多种病原感染研究的首选动物。然而人类或是其他动物，他们与小鼠相比，由于进化距离等差异，其免疫系统各自进化而产生进化距离。免疫系统的差异造成小鼠对一些病原不易感。这种现象限制了小鼠动物模型的开发。

针对小鼠的基因工程操作可以改变小鼠的免疫状态，从而导致小鼠对于不同病原的敏感性发生变化。但在进行系统性基因工程操作时，动物本身的免疫系统改变重大，有可能影响动物模型的基本指标。因此开发一种短时间的基因调控技术，较少的改变动物的免疫机能，同时提高小鼠对病原的敏感性的技术十分重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种构建病原感染敏感性动物模型的方法，该方法既可以提高动物对病原的敏感性，又可以保证对动物的免疫机能改变的较少。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种构建病原感染敏感性动物模型的方法，通过基因沉默技术抑制动物Ager基因的表达。

本发明所述方法利用基因沉默技术，针对动物的固有免疫系统的一个受体基因Ager，通过下调该基因的表达水平，建立病原敏感性的动物模型，同时对于一般免疫指标没有显著影响。

在一些实施方案中，本发明所述方法中所述基因沉默的沉默机制为shRNA。shRNA是short hairpin RNA的缩写译为短发夹RNA。shRNA包括两个短反向重复序列。克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列(正义链和反义链)，可加工成siRNA，也可通过目标mRNA互补结合序列特异性地实现mRNA降解。

进一步的，在一些实施方案中，本发明所述方法中所述基因沉默具体方法为构建Ager基因的shRNA载体，转染动物。

在一些实施方案中，本发明针对Ager基因筛选合适的沉默位点，在体外细胞水平进行转染研究，筛选具有较高沉默效率的靶点进行体内研究。

作为优选，本发明所述方法中所述Ager基因的沉默位点的序列如SEQ ID NO:1(aggcgagggaaggaggtca)或SEQ ID NO:3(acagccagtgtccctaata)所示。

进一步的，本发明所述方法中，所述SEQ ID NO:1所示Ager基因的沉默位点的干扰序列如SEQ ID NO:2(ggaggcgagggaaggaggtcactcgagtgacctccttccctcgcctttttt)所示；所述SEQ ID NO:3所示Ager基因的沉默位点的干扰序列如SEQ ID NO:4(ggacagccagtgtccctaatactcgagtattagggacactggctgtttttt)所示。

本发明所述方法中，所述转染具体为shRNA载体包装病毒，将包装好的病毒液接种于动物体内。其中所述病毒可以为腺病毒、逆转录病毒或慢病毒。