[发明专利]槲皮素在蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1抑制剂中的应用

说明书

本发明本发明属于酪氨酸磷酸酶抑制剂筛选技术领域，具体公开了一种槲皮素对蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP‑1抑制剂中的应用，其中槲皮素在体外能抑制包含SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP‑1的活性；本发明通过抑制包含SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP‑1的活性，进而可用于制备治疗及预防与包含SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP‑1活力过高或过表达相关疾病的食品、药物或食品及药物组合物，可以拓展槲皮素在食品、药物以及食品及药物组合物之间的研究。

技术领域

本发明属于酪氨酸磷酸酶抑制剂筛选技术领域，具体涉及一种槲皮素在蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1抑制剂中的应用。

背景技术

SHP-1(SH2-containing tyrosine phosphatase 1)是主要表达于造血细胞的酪氨酸磷酸酶，以前也称造血细胞磷酸酶(HCP)、SHPTP-1、SHP、PTP1C、PTPN6。20世纪90年代初由华盛顿大学等研究组相继分离纯化，并成功克隆其cDNA，现已知shp1基因位于第12号染色体的p12-p13区，含17个外显子，全长17Kb。SH2结构域最先发现于Src样激酶中，这种结构域和某些特定多肽序列内的磷酸酪氨酸残基有很强的亲合力。因此，SHP-1的SH2结构域也发挥着同样的功能并借此将SHP-1招募至其底物附近。

SHP-1在造血细胞信号转导中发挥负调节作用，与造血细胞的激活、增生、分化、转化和细胞间的信号转导等有关。几乎在所有的淋巴瘤、白血病细胞株中都发现了SHP-1mRNA和蛋白水平表达的降低或丧失。

加拿大和美国科学家组成的联合研究小组发现，人体内的SHP-1能够在控制血糖方面发挥作用。他们使用先天功能性缺失SHP-1蛋白的Ptpn6me-v/me-v小鼠，发现与其同时出生的野生型小鼠相比，该种小鼠加强了肝脏和肌肉中的对IRS-PI3K-Akt的胰岛素受体信号及增强了CEACAM1的磷酸化，具有明显的葡萄糖耐受性及胰岛素敏感性，这预示着通过抑制SHP-1蛋白在体内的活性，有可能恢复糖尿病人对血糖的控制能力。

本发明应用SHP-1的催化结构域(ΔSHP-1，分子量4.5kD)为靶标，通过体外酶反应动力学实验，从中药的单体中筛选对其有高效专一抑制作用的单体。

发明内容

(一)解决的技术问题

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种槲皮素在蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1抑制剂中的应用。

(二)技术方案

本发明通过以下技术方案予以实现：

一种槲皮素在蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1抑制剂中的应用。

优选地，所述蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1为SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1。

优选地，所述槲皮素对包含SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1抑制性的测定步骤如下：

(1)槲皮素的处理：精确称取槲皮素溶于二甲基亚砜，配成贮液，至于4℃备用；

(2)槲皮素抑制效果的测定：以p-NPP为底物，向MOPS缓冲液中加入浓度差为10μg/ml的SHP-1及不同稀释浓度的上述贮液，反应15min后用NaHCO3终止反应后，在405nm波长处测定其光吸收值，并以未加入上述贮液的实验体系为空白对照，其光吸收值为A₀，其余加入不同稀释浓度的上述贮液的各实验体系的光吸收值为A，得到不同浓度槲皮素对ΔSHP-1的抑制率为：

抑制率＝(A₀-A)/A₀×100％

以抑制剂的浓度为横坐标，以抑制剂对SHP-1的抑制率为纵坐标作图，得到槲皮素SHP-1的IC₅₀。