[发明专利]藤梨根中单体化合物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物的应用

说明书

本发明属于医药技术领域，涉及藤梨根提取物的制备方法，具体涉及藤梨根提取物中单体化合物的制备及其在抗肿瘤方面的医药用途。本发明单体化合物的制备方法包括：干燥藤梨根用蒸馏水煎煮提取，提取液经煎煮浓缩、冷冻真空干燥得到水提物；将藤梨根提取液进行大孔树脂柱色谱分离，使用水‑乙醇体系梯度洗脱，合并浓缩后得到亚组分A‑E；对亚组份C进行凝胶柱色谱柱分离得到13个组分Z1‑Z13；用制备型高效液相色谱对所述馏分分离纯化得到4个单体化合物，经鉴定其结构分别为：秦皮素(1)、(7S,8R)‑二氢脱氢二松柏醇4‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷(2)、二氢去氢二愈创木基醇(3)和白蜡树素(4)。本发明的藤梨根水提物中单体可用于治疗肿瘤的药物。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及藤梨根提取物的制备方法，具体涉及藤梨根提取物中单体化合物的制备及其在抗肿瘤方面的医药用途。

背景技术

现有技术公开了藤梨根为猕猴桃科植物中华猕猴桃(Actinidia chinensis)的根，是中国特有的品种，主要分布在中国东部地区。资料记载，中华猕猴桃全株均可药用，中医认为其根气微，味苦、涩，具有清热解毒，活血消肿，祛风利湿之功效；其作为一种治疗肿瘤的中药材已经在临床使用近30年，民间用其治疗胃癌、鼻咽癌、乳腺癌等；实践显示，其对于改善癌症患者身体功能有良好的作用，可有效的提高患者自身抵抗肿瘤的能力，提高治疗肿瘤的效果。临床实践中藤梨根汤剂治疗消化道癌症是常规中药处方。

近年来，通过国内外对藤梨根提取物抗肿瘤作用的研究表明，藤梨根中含有多种生物活性成分；如，李昊等采用四甲基氮唑盐比色法(MTT法)观察藤梨根不同浓度和不同作用时间对胃癌细胞的抑制作用，结果显示藤梨根原液药物浓度经过稀释4倍以后，抑制肿瘤的效果达到88.19％(李昊等，藤梨根对胃癌细胞抑制作用的实验研究，河北中医,2004,26(04):314-315.)；国宏莉等通过MTT法测定藤梨根正丁醇提取液的抗食管癌Eca-109细胞的生长作用，其生长抑制率可达87.2％(国宏莉等，藤梨根正丁醇提取物在人食管癌细胞生长中的作用，中药材,2008,31(07):1030-1032.)；单建贞等研究发现藤梨根中熊果酸能够对表皮生长因子(EGFR)表达阳性的结肠癌细胞起到生长抑制作用，结果显示藤梨根有效成分熊果酸能够抑制结肠癌细胞增殖及其诱导凋亡作用(单建贞，藤梨根有效成分对结肠癌细胞增殖抑制作用及相关机制的研究，浙江大学,2010)；除此之外，王岚等发现藤梨根正丁醇提取物能够对肺癌A549细胞有抑制作用，提取物浓度为1.25,0.625g/L，可以使G0/G1期出现阻滞(王岚等，藤梨根正丁醇提取物和总黄酮苷抗肿瘤作用研究，中国中药杂志,2010,35(16):2184-2186)，等等。

现有的藤梨根提取物的制备方法中提取工艺大多是先采用有机溶剂进行浸提，然后通过乙酸乙酯和正丁醇的进行萃取，然后再利用石油醚-丙酮，氯仿-甲醇或者聚酰胺进行洗脱，最后再通过纯化手段得到藤梨根单体成分，该提取工艺忽视了临床使用中药的常规方式，所得到的提取物或者单体成分是否能在临床使用中发挥疗效尚不明确，其抗癌的成分和机理还需要进一步研究。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供藤梨根提取物新的的制备方法，具体涉及藤梨根提取物中单体化合物的制备及其在抗肿瘤方面的医药用途。

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的现状，提供藤梨根提取物新的的制备方法，具体涉及藤梨根提取物中单体化合物尤其是其中四个单体化合物的制备及其在抗肿瘤方面的医药用途。

具体的，本发明提供了藤梨根提取物中单体化合物制备方法，尤其是藤梨根水提物中四个单体化合物的分离纯化方法及其用途，本发明藤梨根中单体化合物具有抑制肿瘤细胞的作用。

本发明藤梨根水提物中单体化合物为如下结构式的秦皮素(1)、(7S,8R)-二氢脱氢二松柏醇4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、二氢去氢二愈创木基醇(3)、白蜡树素(4)：