[发明专利]一种免标记荧光检测金黄色葡萄球菌mecA基因的方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种免标记荧光检测金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于：包括发夹探针HP、缓冲溶液、N-甲基卟啉二丙酸IX和核酸外切酶Exo III；其中发夹探针HP从5'端开始依次为I、II、III和IV区域，其中I区5'端为G-quadruplex序列；II区构成发夹探针茎环结构的环；I区中G-quadruplex序列以外的序列加上II区序列这一段区域与mecA基因序列相同；III区与I区完全互补，共同构成发夹探针茎环结构的茎；IV为3'端凸起，通过碱基互补识别mecA基因；其中发夹探针HP的I区序列为：GGGTAGGGCGGGTTGGGATTGGGATCA；发夹探针HP的II区序列为：TAGCGTCAT；发夹探针HP的IV区序列为CTATGATCCCAAT；发夹探针HP的序列如下所示：HP:5'-GGGTAGGGCGGGTTGGGATTGGGATCATAGCGTCATTGATCCCAATCCCAACCCGCCCTACCCCTATGATCCCAAT-3'。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：缓冲溶液包括Tris-HCl缓冲溶液，pH＝7.0-7.5。

3.一种非疾病诊断目的的免标记荧光检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)将发夹探针HP溶解于缓冲溶液中，90-95℃加热5-10分钟，冷却至室温；

(2)将待测溶液加入到含有发夹探针HP和Exo III的缓冲溶液，室温下反应；再加入N-甲基卟啉二丙酸IX荧光染料，室温下反应；在激发波长为399nm，发射波长为610nm的条件下，测定上述体系的荧光强度；

其中，发夹探针HP、缓冲溶液、N-甲基卟啉二丙酸IX和核酸外切酶Exo III如权利要求1-2任一项所述。