[发明专利]一种鲍曼不动杆菌的特异基因及其引物和应用有效
| 申请号： | 201811207259.8 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109266658B | 公开（公告）日： | 2022-08-19 |
| 发明（设计）人： | 宋玉竹;王乐飞;张阿梅;夏雪山;毛小芹;陈强;韩芹芹;张金阳 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/6844;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650500 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 不动 杆菌 特异 基因 及其 引物 应用 | ||
1.一种用于检测鲍曼不动杆菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含外游引物如SEQID NO：1和SEQ ID NO：2所示，检测鲍曼不动杆菌的方法为
用SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物对对待测菌种基因组DNA进行PCR扩增，然后琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，出现目的条带，则是鲍曼不动杆菌；没有目的条带，则不是鲍曼不动杆菌；
PCR反应体系为：12.5μL 2×TSINGKE Master Mix，包含DNA polymerase 1U,1.5mMMgCl2，200μM dNTP，10μM的外游引物，50ng基因组DNA，无菌水补至25μL；
反应程序为：95℃预变性10min，95℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸7min。
2.一种用于检测鲍曼不动杆菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含外游引物如SEQID NO：1和SEQ ID NO：2所示，内游引物如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，检测鲍曼不动杆菌的方法为：用SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：4所示的引物对对待测菌种基因组DNA进行环介导等温扩增，然后琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，出现目的条带，则是鲍曼不动杆菌；没有目的条带，则不是鲍曼不动杆菌；
所述环介导等温扩增反应体系为：12.8U Bst 2.0DNA Polmerase，0.14mM MgSO4，0.040mM dNTP，8μM内游引物，1μM外游引物，2.5μL10×Bio Labs Buffer，100ng基因组DNA，最后，加去核酸酶水补足25μL；反应过程为：65℃温育38min，80℃变性2min。
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