[发明专利]用于敲除Egr3基因的腺相关病毒重组载体及其构建方法和用途在审
| 申请号： | 201811203666.1 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN109295098A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 陈意雄;蔡晓龙;邹杰;朱鹏飞;白易鑫 | 申请（专利权）人： | 汉恒生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 常州市权航专利代理有限公司 32280 | 代理人： | 黄晶晶 |
| 地址： | 201800 上海市嘉定*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 腺相关病毒 重组载体 敲除 重复序列 反相 构建 基因敲除载体 肿瘤血管生成 编码序列 肝癌疾病 肝癌模型 序列元件 有效抑制 基因 移植瘤 生长 治疗 发现 研究 | ||
1.一种用于敲除Egr3基因的腺相关病毒重组载体，其特征在于，所述腺相关病毒重组载体至少包括如下可操作性连接的序列元件：
5’末端反相重复序列，CMV启动子，sacas9编码序列，polyA信号序列，U6启动子序列，gRNA序列，3’末端反相重复序列。
2.根据权利要求1所述的腺相关病毒重组载体，其特征在于：
所述腺相关病毒重组载体序列如SEQ ID NO.1：所示，
所述5’末端反相重复序列如SEQ ID NO.1：中第1～141位所示；
所述CMV启动子序列如SEQ ID NO.1：中第154～737位所示；
所述sacas9编码序列如SEQ ID NO.1：中第762～3345位所示；
所述polyA信号序列如SEQ ID NO.1：中第4137～4344位所示；
所述U6启动子序列如SEQ ID NO.1：中第4351～4591位所示；
所述gRNA序列如SEQ ID NO.1：中第4600～4620位所示；
所述3’末端反相重复序列如SEQ ID NO.1：中第4710～4850位所示。
3.如权利要求1或2所述腺相关病毒重组载体用于制备肝癌治疗药物的用途。
4.一种细胞，其特征在于，所述细胞内含有如权利要求1或2所述腺相关病毒重组载体。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括如权利要求1或2所述的腺相关病毒重组载体和药学上可接受的载体，或者如权利要求4所述的细胞和药学上可接受的盐。
6.如权利要求1或2所述的腺相关病毒重组载体的构建方法，所述方法至少包括以下步骤：
(1)gRNA设计和双链合成；
(2)AVV-sacas9重组载体构建。
7.如权利要求2或3所述的EGR3基因敲除载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中gRNA扩增时采用的正向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，反相引物的序列如SEQ ID NO.3所示。
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