[发明专利]猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测引物组、试剂盒以及检测方法

说明书

本发明提供了一种猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测引物组，以及应用该引物组的试剂盒和检测方法，具有以下优点：(1)扩增效率高、产量大，反应稳定、可重复性好，产物的种间特异性良好，可靠性高；检测的灵敏度达到5.01×10²拷贝/uL，比传统PCR高一个数量级；(2)反应条件简单，只需要设置一个反应温度和一个终止温度即可；(3)实验设备要求较低，恒温水浴锅即可满足；(4)普通PCR方法检测至少需要2～3个小时，LAMP检测只需要60min可得到检测结果，监测更加快速、高效；(5)借助荧光染料，可目测扩增结果，检测结果直观、清晰。本发明可为FPV的早期诊断提供一种灵敏、快速的检测方法，适用于一线动物医疗或检疫人员进行大规模病原检测。

技术领域

本发明属于病原微生物检测技术领域，特别涉及一种猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法。

背景技术

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus，FPV)，又称猫瘟热病毒，属于细小病毒科细小病毒属，该病毒为单链DNA病毒，基因组全长约5200nt，编码VP1、VP2两种结构蛋白，其中VP2蛋白为主要衣壳蛋白，是FPV的主要免疫保护性抗原蛋白。FPV感染范围较广，可感染猫科、鼬科及浣熊科动物，如猫、狮、虎、豹等；该病毒传播较快，可通过感染动物的粪便、尿液及呕吐物进行水平传播，妊娠母猫可垂直传播给胎儿；FPV致病性较强，可导致妊娠母猫流产或产畸形胎，死亡率高且无任何病前征兆。目前该病的检测主要依赖于病毒分离及血清学诊断，这些方法耗时长，成本高，不适用于临床样品的快速检测。随着动物园猫科动物及宠物猫的养殖量增多，疫病监测及防控需高度重视，建立一种适于临床检测FPV的快速检测方法迫在眉睫。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术是一种新型的核酸扩增技术，该技术依赖具有链置换活性的BstDNA聚合酶，利用4条特异性引物在等温条件下扩增出LAMP特有的梯状条带。LAMP技术特异性好、检测快速、操作简单，已在禽流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及猪流行性腹泻病毒等方面成功建立了快速检测方法。本研究旨在利用LAMP技术建立一种检测FPV的高效、快速、特异性的检测方法，用于FPV的早期诊断和防控。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法。

本发明具体技术方案如下：

本发明一方面提供了一种猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测引物组，包括如下引物序列：

F3:5’-TGCATCATTGATGGTTGC-3’(如SEQ ID NO.1所示)；

B3:5’-AGTAAGTGTACTGGCACAG-3’(如SEQ ID NO.2所示)；

FIP:5’-GGTTGGTTTCCATGGATAAAAACCTATGCCATTTACTCCAGCAG-3’(如SEQ ID NO.3所示)；

BIP:5’-CATCTCATACTGGAACTAGTGGCATGAACATCATCTGGATCTGTAC-3’(如SEQ IDNO.4所示)。

上述引物能特异性地识别FPV病毒DNA上VP2基因(长度约468bp)保守序列两端的6个位点，并使VP2基因在LAMP扩增过程中产生茎环结构，扩增效率高，且种间特异性良好，可以准确识别FPV病毒。

本发明另一方面提供了一种猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测试剂盒，所述试剂盒包括上述LAMP检测引物组，还包括LAMP反应液，所述LAMP反应液包括如下成分：