[发明专利]一种预防叶子花组培苗黄化的方法

说明书

本发明公开了一种预防叶子花组培苗黄化的方法。包括以下步骤：(1)外植体选择；(2)消毒处理；(3)接种；(4)初代培养；(5)增殖培养。本发明诱导率达95％以上，增值系数为3‑5，最重要是能够预防叶子花组培苗黄化，使组培苗正常分化和生长，从而确保叶子花的规模化生产顺利开展。

技术领域

本发明涉及植物组培技术领域，具体是一种预防叶子花组培苗黄化的方法。

背景技术

叶子花(Bougainvillea spectabilia Willa)系紫茉莉科叶子花属常绿攀援或披散灌木，原产巴西，又名三角梅、勒杜鹃、宝巾花等，叶子花品种丰富，全世界叶子花的原种、栽培种、变种、杂交种数量有300种之多。叶子花适应性强，且花色多、花期长，是热带与南亚热带重要的园林绿化树种。叶子花繁殖方式主要为无性繁殖，其中扦插和嫁接是最常用的方法，但有些市场前景广阔、观赏价值很高的品种长势弱、抽枝萌芽力不强，扦插和嫁接成活率均不高，其繁殖速度远远跟不上市场需求。

植物组织培养繁殖速度快、周期短，可人为控制环境因素，不受外界气候和基质等因子变化的影响，通过组培方式可以解决因扦插、嫁接等其他繁殖困难的问题，为规模化生产提供技术支撑。目前，已有关于叶子花组织培养的报道，但针对叶子花组培苗黄化这一问题还未见报道。本发明对外植体选择、消毒处理、初代培养和继代培养共4个环节进行反复摸索和筛选，获得阻止叶子花组培苗黄化的方法，该方法可确保组培苗正常生长，加快组培苗的分化速度，从而推进叶子花的规模化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种预防叶子花组培苗黄化的方法，对各个组培环节进行严格把关，尤其是通过对大量元素进行调整，获得了理想的配方，与其他叶子花组培方法相比，此种方法的分化系数更高、长势更好。

本发明通过以下技术方案达到上述目的，一种预防叶子花组培苗黄化的方法，包括如下步骤：

(1)外植体选择：于晴朗的天气上午9:30～10:00，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢；

(2)消毒处理：将采集的嫩梢剪成6-7cm长的段，高锰酸钾浸泡5min，多菌灵浸泡8min后放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h，然后将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75％酒精消毒30s后，用无菌水冲洗4-5次；再用0.1％升汞+0.05％吐温消毒8min，最后用无菌水冲洗5-6次；

(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的培养皿上，用解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼，然后将带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体；

(4)初代培养：初代培养培养温度为25±1℃，光照强度为1500-3000Lx，光照波长为350～750nm，光照时数为16～18h/d；

(5)增殖培养：将茎段初代培养得到的芽接种于增殖培养培养基，置于温度温度25±1℃，光照强度1500-3000LX，光照10～14h/d的环境中进行增殖培养。

优选的，步骤(2)中，还包括预处理：用抹布轻轻擦掉嫩梢的表皮茸毛，然后用自来水冲洗干净。

优选的，步骤(2)中，酒精及升汞+吐温消毒过程中，需不停摇晃瓶子，使每段外植体都能与液体充分接触。

优选的，步骤(3)中，培养皿需经高温灭菌，解剖刀需经干热灭菌器和酒精灯消毒。

优选的，步骤(4)中，初代培养基各组分与含量分别为：改良MS+BA2.0mg/L+蔗糖30g/L。