[发明专利]一种脂肪组织的冻存液及脂肪组织冻存的方法

权利要求书

1.一种脂肪组织的冻存液，其特征在于：包括1-2mol/L的DMSO和0-1mol/L的海藻糖，剩余加培养基，所述的培养基为DMEM。

2.如权利要求1所述的一种脂肪组织的冻存液，其特征在于：包括1mol/L的DMSO和0.4mol/L的海藻糖，剩余加培养基，所述的培养基为DMEM。

3.一种脂肪组织冻存的方法，其特征在于包括如下步骤：

S1.脂肪组织冻存前准备：

①实验室温度在15-30℃；

②实验室湿度在20-80％；

③洁净区与非洁净区的压差≥10Pa；

④实验开始前，空间及生物安全柜需在紫外和风机开启30min后进去。

S2脂肪组织交接：

①接收前准备一个托盘和离心管架，用75％酒精进行消毒后待用；

②实验室人员与运输人员交接，核对采集套装中的物品是否齐全且一致，并在确认无误后签字确认，所述的采集套装中的物品为采集登记表、脂肪采集瓶、母血管和封口膜；

③核对自体库脂肪、母血管及采集登记表上面外部码是否一致，如不一致，以采集登记表的外部码为准进行更换并记录；

④在采集登记表、脂肪采集瓶及母血管上面粘贴内部码；

⑤根据采集登记表信息完成《自体库脂肪接收登记表》；

⑥接收结束后，将母血管样本放到4℃冰箱保存，将脂肪、条码和采集登记表放置到传递窗；

⑦样本在采集后应在5-6h内运送到接收室。

S3.脂肪组织冻存；

①在制备档案上记录环境状况和脂肪信息；

②将脂肪采集瓶内的脂肪转移至无菌瓶中；

③在生物安全柜中将脂肪分装到50ml离心管中；

④使用生理盐水洗涤血渍，离心；

⑤弃掉上层的油性成分和下层的血细胞；

⑥吸取中间的脂肪组织转移到冻存管或冻存袋中；

⑦取一定量的冻存液在4℃的冰箱中预冷10min，冻存液与所取的脂肪组织的重量比为1:1；

⑧在冻存管或冻存袋中缓慢添加预冷的冻存液并充分混合，在4℃情况下平衡10min；

⑨采用程序降温盒或程序降温仪进行程序降温冻存后转入-80℃冰箱；

⑩送检客户血液以及样本菌检，待所有检测结果合格后，转入液氮保存直至冻存结束。

4.如权利要求3所述的一种脂肪组织冻存的方法，其特征在于：所述冻存后的脂肪组织的复苏方法为开启电热恒温水浴锅，使水温保持在40℃，将冻存管或冻存袋从深低温冰箱取出，或者从液氮中转移至深低温冰箱后再取出，将冻存管或冷冻袋放入电热恒温水浴锅中，快速搅动使其尽快融化解冻，将解冻脂肪转移至50ml离心管中，缓慢添加预冷盐水至50ml离心管中，定容至40ml，离心，弃上清，添加生理盐水，重复一次洗涤。

5.如权利要求3所述的一种脂肪组织冻存的方法，其特征在于：所述脂肪组织质控标准为血液检测无HBV、HCV、CMV、EBV、HIV、HTLV等污染，脂肪组织细菌检测、脂肪组织真菌检测和脂肪组织支原体检测结果均呈阴性，脂肪组织内毒素检测结果≤0.25EU/ml，DMSO含量检测结果≤10％，海藻糖≧15.2％。