[发明专利]一种蛋白共修饰的DNA芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种蛋白共修饰的DNA芯片，其特征在于：所述蛋白共修饰由蛋白质结合在DNA芯片基底表面形成。

2.根据权利要求1所述的DNA芯片，其特征在于：所述蛋白质为牛血清白蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的DNA芯片，其特征在于：所述蛋白质上的巯基处于封闭状态。

4.根据权利要求1或2所述的DNA芯片，其特征在于：所述基底表面具有小分子修饰试剂形成的抗非特异性吸附层；

任选的，所述小分子修饰试剂为牛磺酸、氨丙基磺酸、丝氨酸、谷氨酸和磷酸丝氨酸中的至少一种。

5.一种蛋白共修饰的DNA芯片的制备方法，其特征在于：包括固定处理，所述固定处理包括使含有DNA的固定液与基底表面接触，将DNA固定在基底表面，所述固定液中含有蛋白质，所述蛋白质与基底表面结合，形成蛋白共修饰；

任选地，所述蛋白为牛血清白蛋白；

任选的，所述的基底表面具有环氧硅烷修饰，所述蛋白质与环氧硅烷反应结合在基底表面。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：还包括巯基封闭处理，所述巯基封闭处理是将基底表面固定的蛋白质上的巯基封闭；

任选的，所述巯基封闭处理具体包括，利用还原试剂将所述蛋白质中的二硫键还原，生成还原性的巯基，再采用巯基封闭试剂封闭所生成的还原性的巯基；

任选地，所述还原试剂为三(2-羧乙基)膦、三(3-羟基丙基)膦、二硫苏糖醇和巯基乙醇中的至少一种；

任选的，所述巯基封闭试剂为碘乙酰胺、碘乙酸、马来酰亚胺和环氧丙醇中的至少一种。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：还包括弱钝化处理，所述弱钝化处理包括将含有催化剂和蛋白质的弱钝化反应液与固定处理后的芯片接触，所述催化剂能够促进DNA和蛋白质与基底表面结合，使DNA和蛋白质充分固定在基底表面；

任选地，所述催化剂为表面活性剂；

任选的，所述表面活性剂选自十六烷基三甲基溴化铵、双十八烷基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵和四辛基溴化铵中的至少一种；

任选的，所述弱钝化反应液中，表面活性剂的浓度为1-25mmol/L；

任选的，所述弱钝化反应液中，表面活性剂的浓度为10mmol/L；

任选地，所述蛋白质为牛血清白蛋白。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述弱钝化反应液中还包含小分子修饰试剂，所述小分子修饰试剂与基底表面结合，形成抗非特异性吸附层；

任选的，所述小分子修饰试剂的浓度为15-45mmol/L；

任选的，所述小分子修饰试剂的浓度为30mmol/L；

任选的，所述弱钝化处理的反应条件为35℃-40℃反应2h-5h。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：还包括钝化处理，所述钝化处理包括采用钝化液与弱钝化处理后的基底表面接触，在恒温条件下进行钝化；

任选的，还包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括采用三种洗涤液依序对钝化处理的基底进行洗涤，每种洗涤液至少洗涤一次，三种洗涤液按照使用顺序依序为RI-05、RI-06、RI-07，其中，RI-05为PBS缓冲液，RI-06为HEPES缓冲液与NaCl溶液组成的混合溶液，RI-07为双蒸水。

10.根据权利要求1-4任一项所述的DNA芯片在核酸或蛋白检测分析中的应用。