[发明专利]抗GPC3单克隆抗体、由其修饰的免疫效应细胞及其应用

说明书

本发明涉及抗GPC3单克隆抗体、由其修饰的免疫效应细胞及其应用。揭示了一种特异性识别肿瘤细胞GPC3的抗体，该抗体特异性良好，特别适用于制备基于CAR技术的免疫效应细胞，其也可以被应用于制备各种靶向性抗肿瘤药物以及诊断肿瘤的药物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种抗GPC3单克隆抗体、由其修饰的免疫效应细胞及其应用。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是一种细胞表面膜蛋白，属于肝素蛋白聚糖Glypicans家族的一员，其基因编码的70kD核心蛋白被前蛋白转换酶Furin酶切后，产生40kD的氨基端亚单位和30kD具有两条硫酸乙酰肝素(HS)链的羧基端亚单位。GPC3蛋白通过糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI)锚定在细胞膜上。

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)免疫疗法，是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方式之一。它的基本原理就是利用改造后的病人自身的免疫细胞来清除癌细胞，与以往治疗方法不同的是，这是一种细胞疗法，而不是传统的药物治疗。

2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。免疫细胞治疗是采集患者外周静脉血，在GMP实验室内分离外周血单个核细胞，在多种细胞因子诱导下，大量扩增出具有高效抗瘤活性的免疫效应细胞，再通过静脉、皮内注射、介入等回输到患者体内，达到增强患者免疫功能和杀伤肿瘤细胞的目的，常用的免疫细胞治疗手段包括CIK、DC、TIL、DC+CIK细胞等。

但是，在临床上发现肿瘤时，一般已是中晚期，此时病人体内肿瘤细胞占优势，严重损害了机体的免疫功能，在这样的免疫系统微环境下，DC细胞功能受损，激活T细胞效率较低，攻击癌细胞能力不够，也不够精准；另外，肿瘤细胞通过低表达或不表达MHC分子的逃逸机制，逃脱免疫细胞的攻击。这就需要制造精密制导、精准打击的免疫细胞武器，克服MHC介导的杀瘤机制。于是，靶向性抗肿瘤细胞CAR-T技术应运而生。

在CAR-T的细胞治疗中，CD19作为最早的治疗靶点来治疗B细胞淋巴瘤，此CAR-T是将识别CD19的抗体可变区基因序列与淋巴细胞免疫受体的胞内区序列拼接后，转染至患者T细胞中，形成的CD19 CAR-T细胞能够特异性攻击具有CD19抗原的B细胞，从而促使机体清除具有CD19抗原的肿瘤细胞。

目前，尽管基于CAR-T细胞治疗技术已成为本领域研究的热点，但是CAR-T细胞治疗研究的难点在于：首先，不易于找到合适的靶点；其次，针对特定的靶点，不易于获得靶向性理想、适于进行免疫细胞修饰的胞外结合区；第三，经修饰的免疫细胞活力低或增殖受到影响。鉴于上述难点，尽管本领域已经鉴定的肿瘤特异性表达标志物已有较多，能够成功被开发、用于临床，并且临床上效果理想的CAR-T细胞治疗技术仍然为数寥寥，有待于进一步开发、优化和完善。

发明内容

本发明的目的在于提供抗GPC3单克隆抗体、由其修饰的免疫效应细胞及其应用。

在本发明的第一方面，提供特异性抗GPC3的单克隆抗体，该抗体具有选自下组的轻链可变区：SEQ ID NO:1中第1-112位，SEQ ID NO:3中第1-112位，SEQ ID NO:4中第1-112位，SEQ ID NO:7中第1-112位；以及选自下组的重链可变区：SEQ ID NO:2中第1-121位，SEQID NO:5中第1-121位，SEQ ID NO:6中第1-121位，SEQ ID NO:8中第1-121位。

在一个优选例中，该抗体是鼠源抗体，人源化抗体，嵌合抗体，或含有所述鼠源抗体、人源化抗体、嵌合抗体的重链可变区以及轻链可变区的scFv抗体。