[发明专利]利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的方法及其生产的单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的方法，该方法包括：将复苏后的杂交瘤细胞置于第一细胞培养基中进行传代培养和扩大培养，该第一细胞培养基中血清的体积分数大于10％；将杂交瘤细胞转移至第二细胞培养基中进行扩大培养，该第二细胞培养基中血清的体积分数小于等于10％；将杂交瘤细胞转移至无血清细胞培养基中培养，进行单克隆抗体的生产。本申请通过采用第一细胞培养基进行“富养”、采用第二细胞培养基进行“均一群养”，确保不同批次的杂交瘤细胞在抗体生产起始时的浓度和体积保持一致，使得整个生产流程可以广适于不同的杂交瘤细胞株，抗体生长周期稳定；在无血清细胞培养基中生产单克隆抗体，抗体产品质量高。

技术领域

本发明属于杂交瘤细胞培养和单克隆抗体生产技术领域，具体涉及一种利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的方法及其生产的单克隆抗体。

背景技术

杂交瘤细胞(hybridoma)是用骨髓瘤细胞和单克隆的B细胞融合成的细胞，其融合细胞既具有骨髓瘤细胞无限复制的能力，也具有成熟的单克隆B浆细胞不断分泌单克隆抗体的功能。抗体工业生产上利用这种融合细胞进行单克隆抗体的规模化生产，这种融合细胞被称为杂交瘤细胞。

传统的采用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的生产方案一般是将杂交瘤细胞置于含10％胎牛血清的RPMI培养基中培养，这种方法生产的单克隆抗体的纯度只有80-90％。为了提高抗体纯度，现有技术中对用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的生产方案进行了改进，改进方案主要有两种：

(1)低含量血清培养基培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体的生产方案：首先将杂交瘤细胞从液氮保存罐中取出并进行细胞复苏，复苏后将杂交瘤细胞置于含10％胎牛血清的RPMI培养基中传代(传代5天)，传代后将杂交瘤细胞培养在胎牛血清的浓度为2％的低血清RPMI培养液中进行扩大杂交瘤细胞扩大培养和抗体生产，抗体生产时间约为20天。

这种生产方案的不足之处在于，(a)杂交瘤细胞在2％的胎牛血清RPMI培养液中完成单克隆抗体的生产，但胎牛血清中仍旧存在较多蛋白，直接导致杂交瘤细胞分泌的抗体纯度不高，造成后续产品纯度(约90％)和质量较差；(b)整个生产周期需要25天，周期较长；(c)由于培养基营养成分较低，较多种类杂交瘤细胞在2％的低血清RPMI培养液中无法完成扩大培养。

(2)胎牛血清含量梯度下降的杂交瘤细胞培养方案：首先将杂交瘤细胞从液氮保存罐中取出并进行细胞复苏，复苏后将杂交瘤细胞置于含10％胎牛血清的RPMI培养基中传代(传代5天)，传代后将杂交瘤细胞先后在含10％,8％,6％,4％,2％胎牛血清的RPMI培养基中传代培养后(一共培养15天)，最后将杂交瘤细胞转移到无血清的杂交瘤细胞培养基(如，赛默飞Gibco CD hybridoma medium)进行扩大培养和抗体生产，抗体生产时间为15天。

该生产方案的不足之处在于：(a)杂交瘤细胞在转移到无血清培养基之前有为期15天的胎牛血清RPMI培养液血清浓度渐降培养过程，导致生产周期延长了15天，整个抗体生产周期至少需要35天；(b)在血清渐降培养过程中，杂交瘤细胞难以保持最佳的生长状态，抗体生产质量堪忧，且人为操作会导致细胞培养状态批次间不稳定，最终将导致抗体产品批次间质量不稳定；(c)不同杂交瘤细胞对血清渐降过程的适应程度不同，导致不同种类的杂交瘤细胞的生产周期差异性大，针对不同的杂交瘤细胞的生产流程无法达到一致化；(d)杂交瘤细胞在2％的胎牛血清RPMI培养液中完成单克隆抗体的生产，但胎牛血清中仍旧存在较多蛋白，直接导致杂交瘤细胞分泌的抗体纯度不高，造成后续产品纯度(约90％)和质量仍较差。

针对上述问题，目前的主流解决思路是开发新的无血清培养基，以在保证杂交瘤细胞具有良好生长状态的同时尽可能提高单克隆抗体的纯度。但无血清培养基的开发目前还未获得突破性进展，生产的单克隆抗体的质量和产量依旧不高。

发明内容

本申请的发明目的是提供一种生产周期短、生产的单克隆抗体纯度高的利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的方法。