[发明专利]一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法

权利要求书

1.一种利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，包括重楼属植物基因组DNA的提取与检测；CDDP多态性引物的筛选；利用筛选的CDDP多态性引物对重楼属植物进行PCR扩增与电泳检测；选取核心引物构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。

2.根据权利要求1所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，包括步骤：

1)采集重楼属植物，提取重楼属植物基因组DNA，并检测基因组DNA的完整性和浓度；

2)选取两种重楼属植物的基因组DNA进行CDDP多态性引物的筛选；

3)利用筛选的CDDP多态性引物对重楼属植物进行PCR扩增与电泳检测；

4)从CDDP多态性引物中选取核心引物，构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。

3.根据权利要求2所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，在步骤1)中，所采集的重楼属植物资源包括七叶一枝花(Paris polyphylla)、狭叶重楼(P.polyphylla var.stenophylla)、华重楼(P.polyphylla var.chinensis)、金线重楼(P.delavayi)、长药隔重楼(P.polyphylla var.thibetica)、球药隔重楼(P.fargesii)、短瓣球药隔重楼(P.fargesii var.brevipetalata)、白花重楼(P.palyphylla var.alba)、宽瓣球药隔重楼(P.fargesii var.latipetala)、滇重楼(P.palyphylla var.yunnanensis)、黑籽重楼(P.thibetica)、无辦黑籽重楼(P.var.apetala)、具柄重楼(P.fargesiivar.petiolata)。

4.根据权利要求2所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，在步骤2)中，所选择的两种重楼属植物为华重楼(P.polyphylla var.chinensis)、长药隔重楼(P.polyphylla var.thibetica)。

5.根据权利要求2所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，在步骤3)中，CDDP-PCR扩增的反应体系为：20μl反应体系中包含10.5μL 2×Taq Master Mix，5.4μL 2.5μmol·L^-1的引物，1.8μL的DNA(50ng·μL^-1)，加灭菌ddH2O补齐体积至20μL；

CDDP-PCR扩增程序为：94℃，5min；然后94℃，0.5min，45-55℃，1min，72℃，1.5min，40个循环；循环结束后72℃再延伸10min。

6.根据权利要求2所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，在步骤4)中，选取3个核心引物构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。

7.根据权利要求6所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，所述3个核心引物的信息分别为：序列5′-ACSCCSATCCACCGG-3′，退火温度45.0℃；序列5′-CACGAGGACCTSCAGG-3′，退火温度45.9℃；序列5′-CACTACCGCGGSCTSCG-3′，退火温度51.5℃。

8.根据权利要求2所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法，其特征在于，在步骤4)中，利用筛选的核心引物对重楼属植物资源的基因组DNA进行PCR扩增，统计条带的有无，以重楼属植物编号为横行，分子量大小为纵行，有带标记为实心黑色方框，无带标记为空白方框，构建重楼属植物的CDDP指纹图谱。

9.权利要求1所述利用CDDP标记构建重楼属植物指纹图谱的方法在重楼属种质资源鉴定、遗传多样性分析中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，用于鉴定未知重楼属植物时，首先按权利要求1所述方法构建未知重楼属植物的CDDP指纹图谱的构建，将其与按权利要求1所述方法已构建的CDDP指纹图谱进行比对分析，当CDDP指纹图谱吻合度达到95％时，判定是同一种；当CDDP指纹图谱介于90％-95％时，判定为是近缘种；当CDDP指纹图谱吻合度低于90％时，判定不属于已知重楼属植物。