[发明专利]CA199定量检测试剂盒用磁微粒化学发光产品的制备方法

说明书

本发明公开了一种CA199定量检测试剂盒用磁微粒化学发光产品的制备方法：取磁珠原液加入到缓冲溶液中，混匀后，磁铁分离，弃除上清；用缓冲液分别配置二甲基氨基丙基乙基碳酰胺溶液和N~羟基丁二酰亚胺溶液，将其加入磁珠中震荡混匀，洗涤磁珠后，加入缓冲液和CA199单克隆抗体，振荡混匀；磁铁分离弃上清，加入含有氨基酸和表面活性剂的缓冲液进行后封闭、反应，磁铁分离弃去上清，加入封保液反应；磁铁分离后，将磁珠定容，2~8℃保存，磁微粒化学发光产品制备完成。本发明制备方法简单，在原有方法的基础上，在磁珠包被CA199单克隆抗体完成以后，添加氨基酸封闭的过程，使包被等磁微粒效价更高，可以实现更宽等检测范围。提高其灵敏度和磁珠分散状态。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术，尤其是涉及一种CA199定量检测试剂盒用磁微粒化学发光产品的制备方法。

背景技术

糖类抗原CA199是细胞膜上的一种糖脂质，分子量为1000KD，胰腺癌血清中CA199的水平是正常均值的683倍，是目前胰腺癌的有效标志物，临床检测中通常通过检测CA199水平确定血清样本是否来源于胰腺癌患者。

目前检测CA199的方法主要包括酶联免疫分析方法和化学发光分析方法，其中，化学发光分析方法和酶联免疫分析法相比较，前者具有易于自动化、操作简便、灵敏度高、检测范围宽等优点，因而具有较大范围的应用。

CA199定量检测试剂盒包括三个组分：CA199校准品、包被CA199单克隆抗体的固相载体以及辣根过氧化物酶标记的CA199单克隆抗体。其中固相载体包括微孔板、磁性颗粒等，其中以磁微粒为固相载体在磁微粒化学发光产品中最为常见。

磁微粒化学发光产品是基于化学发光免疫分析技术开发的一类体外诊断试剂，具有检测超微量活性物质的功能，和现有的其它诊断试剂相比较，具有准确度高、灵敏性高、精密性好等优点。

磁微粒化学发光产品的技术组成包括免疫技术和化学发光技术两大部分。磁微粒首先通过自身包被抗原或者抗体，将抗原或者抗体进行固相化，制备出磁微粒混悬液，加入酶标记的抗原或抗体以及待检样本，待检样本中的抗原或抗体、磁珠表面的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体通过一定反应模式发生免疫反应，之后加入标记酶的反应底物并将其催化成为有色产物，通过检测有色产物的含量从而鉴定待检样本中抗原以及抗体的含量。

在免疫中使用的磁微粒结构主要包括两部分，具有免疫配基和载体磁性微球，根据免疫配基的不同，目前主要使用的磁珠主要有氨基磁珠、羧基磁珠、羟基磁珠、醛基磁珠等。免疫磁珠中的免疫配基和抗原或者抗体中的免疫配基发生免疫反应结合到磁性载体，在外界磁力存在的情况下，免疫磁珠在混合溶液中移动，从而将靶物质进行分离。

目前用于制备磁微粒化学发光产品所用到的羧基磁珠，其中一种包被抗原或抗体的流程为羧基磁珠首先经过二甲基氨基丙基乙基碳酰胺活化，之后可以与抗原或者抗体的氨基发生化学连接，从而将抗原或者抗体固相化到磁珠表面，用于检测反应，其反应原理见图1。其中在磁微粒包被CA199单克隆抗体的工艺中，羧基磁珠经过EDC活化并与CA199单克隆抗体进行连接，直接使用封保液进行封闭和保存，该工艺表现为磁珠包被CA199单克隆抗体的效价较低，且磁珠分散性、灵敏度和检测范围较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种CA199定量检测试剂盒用磁微粒化学发光产品的制备方法，可有效提高磁珠的分散性、灵敏度和检测范围。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的CA199定量检测试剂盒用磁微粒化学发光产品的制备方法包括下述步骤：

第一步，取30μL磁珠原液加入到300μL缓冲溶液中，在振荡器上混匀5min，磁铁分离，弃除上清，重复5次；