[发明专利]北马兜铃组培苗扩繁方法

说明书

本发明公开了北马兜铃组培苗扩繁方法，采用幼嫩的外植体，通过调节激素比例，优化北马兜铃组培苗生长的最佳培养基配方，建立一套北马兜铃组培苗扩繁的方法体系。采用本发明的北马兜铃组培苗扩繁方法，能够在短期内繁殖得到大量性状一致的种苗，满足生产需要，并为提供优良性状的北马兜铃工厂化育苗提供参考。

技术领域

本发明涉及植物组织培养繁殖技术领域，具体地说，涉及北马兜铃组培苗扩繁方法。

背景技术

马兜铃[Aristolochia debilis Sieb.et Zucc.]为马兜铃科植物北马兜铃或马兜铃的干燥成熟果实，味苦，具有清肺降气、定喘消咳、清肠消痣等功效，用于肺热咳喘、痰中带血等病症(《中华人民共和国药典》，2015年版)。天仙藤[Fibraurea recisa Pierre]为马兜铃科植物北马兜铃或马兜铃的枝叶，具有抗疟疾和抗肿瘤的作用(扶教龙,刘佳,吴晨奇,等.天仙藤化学成分分离纯化研究.上海农业学报,2014,30(6):116-119.)。但马兜铃的主要成分马兜铃酸可导致马兜铃肾病，肾间质纤维化，上尿路上皮癌等(章莹,肖榕,黄杰,等.不同产地马兜铃蜜炙前后HPLC指纹图谱分析.中国药学杂志,2017,52(16):1397-1402)。针对马兜铃酸类物质导致的马兜铃酸肾病，目前多采用炮制手段达到“去毒存效”的目的，主要包括蜜炙、醋炙、盐炙、姜炙、碱制、炒焦等方法。马兜铃经蜜炙后马兜铃酸的含量较生品降低51％～55％，使毒性降低(张金莲,张的凤,罗文华,等.正交实验优选恒温干燥法蜜炙马兜铃降毒炮制工艺.时珍国医国药,2007,18(11)：2710-2711)。以上均从化学角度探讨马兜铃炮制减毒的研究，并未能彻底消除马兜铃毒性。

近年来由于过度采挖，使野生北马兜铃资源面临威胁。为保护该种植物的野生资源，加强对北马兜铃的开发利用，需大力推广北马兜铃的栽培种植，要实现其人工栽培，首要解决的问题就是种苗的繁育，而利用组织培养技术，可以加速其繁殖速度，满足种苗市场的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种北马兜铃组培苗扩繁方法。

本发明构思如下：在无菌条件下，采用幼嫩的外植体，通过调节激素比例，优化北马兜铃组培苗生长的最佳培养基配方，建立一套北马兜铃组培苗扩繁的方法体系。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种用于北马兜铃组织培养的增殖培养基，所述增殖培养基是以4.3-4.5g/L MS培养基为基本培养基，添加0.4mg/L IBA、1mg/L KT、1mg/L 6-BA、28-30g/L蔗糖和7.0-8.0g/L琼脂而形成，调节pH 5.8-6.2。

优选地，所述增殖培养基的配方为：MS 4.43g/L+IBA 0.4mg/L+KT 1.0mg/L+6-BA1..0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH 6.0。

第二方面，本发明提供所述增殖培养基在北马兜铃组织培养中的应用。

第三方面，本发明提供所述增殖培养基的配制方法。包括以下步骤：

1)配制MS基本培养基；

2)配制各激素母液：

IBA母液：称取IBA(吲哚丁酸)10mg，先溶于少量(≤1mL)乙醇，加10mL水定容，配成1mg/mL溶液，于-20℃保存；

KT母液：称取KT(6-糖基氨基嘌呤)10mg，先加少量(≤1mL)1mol/L HCl溶液溶解后，加10mL水定容，配成1mg/mL溶液，于-20℃保存；

6-BA母液：称取6-BA(6-苄基腺嘌呤)10mg，先加少量(≤1mL)1mol/L HCl溶液溶解后，加10mL水定容，配成1mg/mL溶液，于-20℃保存；