[发明专利]一种促进人骨髓间充质干细胞增殖的方法

说明书

本发明公开了一种促进人骨髓间充质干细胞增殖的方法。骨髓间充质干细胞是骨髓中成骨细胞的祖细胞，对其成骨性分化能力的研究一直是骨科领域的一大热点，而促进其向成骨方向分化也是防治骨质疏松症的主要方法之一。目前，骨髓间充质干细胞应用的一个难点在于如何大量获得骨髓间充质干细胞。本发明发现，α‑雪松烯、β‑雪松烯和异雪松酮可以有效促进人骨髓间充质干细胞的增殖，且不会影响其多向分化能力，α‑雪松烯、β‑雪松烯和异雪松酮可以用作添加剂制备促进人骨髓间充质干细胞增殖的培养基，可以制成促进人骨髓间充质干细胞增殖的药物。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及一种促进人骨髓间充质干细胞增殖的方法。

背景技术

骨髓间充质干细胞是骨髓中成骨细胞的祖细胞，对其成骨性分化能力的研究一直是骨科领域的一大热点，而促进其向成骨方向分化也是防治骨质疏松症的主要方法之一。

目前，骨髓间充质干细胞应用的一个难点在于如何大量获得骨髓间充质干细胞。

α-雪松烯、β-雪松烯、γ-雪松烯和异雪松酮为雪松中分离得到的化合物，化学结构如下。

目前尚未见上述化合物在促进骨髓间充质干细胞增殖方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进人骨髓间充质干细胞增殖的方法。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种促进人骨髓间充质干细胞增殖的方法，包括如下步骤：

采集新鲜骨髓，肝素钠抗凝后加等量生理盐水，Percoll细胞分离液密度梯度离心，取中间单核细胞层以低糖DMEM培养基清洗，接种入培养皿中，加入完全培养基后，置于5％CO₂培养箱中培养。24h后换液，弃未贴壁的细胞。以后每2～3d换液，待细胞生长至90％汇合后胰蛋白酶消化传代培养；取传代细胞，消化制成细胞悬液，接种于培养瓶中，培养于完全培养基中，37℃、5％CO₂培养24h后，更换为含药完全培养基继续培养；

所述含药完全培养基含有有效浓度的α-雪松烯或β-雪松烯。

优选地，所述完全培养基为含10％FBS的DMEM/F12培养基。

α-雪松烯或β-雪松烯在制备促进人骨髓间充质干细胞增殖的培养基中的应用。

α-雪松烯或β-雪松烯在制备促进人骨髓间充质干细胞增殖的药物中的应用。

有益效果：

本发明发现，α-雪松烯、β-雪松烯和异雪松酮可以有效促进人骨髓间充质干细胞的增殖，且不会影响其多向分化能力，α-雪松烯、β-雪松烯和异雪松酮可以用作添加剂制备促进人骨髓间充质干细胞增殖的培养基，可以制成促进人骨髓间充质干细胞增殖的药物。

附图说明

图1为各组450nm测定吸光度；

图2为茜素红染色结果，其中：A为对照组染色结果，B为α-雪松烯组染色结果，C为β-雪松烯组染色结果，D为异雪松酮组染色结果；

图3为油红O染色结果，其中：A为对照组染色结果，B为α-雪松烯组染色结果，C为β-雪松烯组染色结果，D为异雪松酮组染色结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

DMEM/F12培养基、低糖DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司。α-雪松烯、β-雪松烯、γ-雪松烯和异雪松酮自制或购买，纯度不低于98％。