[发明专利]过表达AANAT基因在提高莱茵衣藻抗盐能力中的应用

说明书

本发明公开了过表达AANAT基因在用于提升莱茵衣藻抗盐能力的用途。AANAT过表达的莱茵衣藻工程藻，在盐胁迫条件下，可以帮助提高藻细胞的抗氧化系统的酶活及降低膜损伤，以此来应对的不良的外界胁迫，提高莱茵衣藻的自我防护能力。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及过表达AANAT基因在提高莱茵衣藻抗盐能力中的应用。

背景技术

盐胁迫是世界上导致作物生产力下降的主要农业问题之一。盐胁迫通过过多的钠离子对植物造成脱水和渗透胁迫伤害从而影响植物的正常生长和发育，为应对盐胁迫对植物造成的离子毒害和渗透胁迫，植物演化出多种防御机制来保护自己。其中，氧化应激是植物早期快速响应盐胁迫的机制之一，此过程形成的活性氧(ROS)包括：超氧阴离子、过氧化氢和羟基自由基等。而且，ROS作为强氧化剂，高浓度的ROS可以通过脂质过氧化破坏膜，破坏DNA链并使各种重要的酶失活。植物为了应对ROS的伤害，形成了一套由抗氧化酶和非抗氧化酶组成的抗氧化体系。抗氧化酶主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)等，植物通过这些酶的作用清除或是减少ROS的积累，减轻和抵御盐胁迫对植物细胞的伤害。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种过表达AANAT基因在提高莱茵衣藻抗盐能力中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，过表达AANAT基因在用于提升莱茵衣藻抗盐能力的用途。

进一步地，采用玻璃珠转化法将AANAT基因导入莱茵衣藻的核基因组。

本发明还公开了过表达AANAT基因用于促进褪黑素在植物中过量表达的作用。

进一步地，该植物为莱茵衣藻。

本发明过表达AANAT基因在提高莱茵衣藻抗盐能力中的应用，通过基因工程技术得到的AANAT过表达的莱茵衣藻工程藻，在盐胁迫条件下，可以帮助提高藻细胞的抗氧化系统的酶活及降低膜损伤，以此来应对的不良的外界胁迫，提高莱茵衣藻的自我防护能力。

附图说明

图1莱茵衣藻核表达载体构建流程图；

图2是PUCK-AANAT质粒鉴定图；

其中：APCR：M 15kb Marker，1-4pUCK-AANAT，5空白对照；

B Nde I、EcoR I双酶切验证：M 10kb Marker，1空白对照，2-3 pUCK-AANAT；

图3为pDBle-AANAT重组质粒PCR验证及双酶切验证图；

其中：APCR：M 15kb Marker，1-8pDBle-AANAT，9阳性对照，10空载体对照，11空白对照；

B Nde I、EcoR I双酶切验证图：M 15kb Marker，1空白对照，2-3 pDBle-AANAT；

图4转化藻株在Ble抗性TAP平板上的培养图；

其中：A附加5.0μg/mL Ble TAP平板转化衣藻继代培养图；

B附加10.0μg/mL Ble TAP平板转化衣藻培养图；

图5为通过PCR分析对不同藻类菌株中Ble基因的分子生物学分析：M为2kbMarker，1-8为转化藻株，9为阳性对照，10为空载体转化莱茵衣藻，11为未转化藻株，12是空白对照。

图6通过定量实时RT-PCR检测不同藻株中目的基因AANAT的相对表达量。NT是未转化的衣藻；CK是空载体转化的衣藻；T1，T2，T4，T5，T6和T8是转化的衣藻属菌株；误差棒是三次测量的平均值(n＝3)±标准差。