[发明专利]一种神经元特异性烯醇化酶含量测定用液态校准品

说明书

本发明公开了一种神经元特异性烯醇化酶含量测定用液态校准品，包括以下组分：pH6~8的缓冲液10~200mmol/L，防腐剂0.1~0.5%，蛋白质类稳定剂1~5%，金属离子类稳定剂0.01~1%（w/v）,神经元特异性烯醇化酶抗原0~500ng/mL。的优点在于：通过金属离子对NSE抗原分子的三级立体结构有支撑的作用，有效地提高了NSE蛋白的稳定性，使得制备的NSE液态校准品稳定性较好，从而使NSE标准品不用冻干，使用时也无需复溶，减少了复溶过程中可能出现的不可控因素，使得临床检测结果更为准确。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，尤其是涉及一种神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量测定用液态校准品。

背景技术

神经元特异性烯醇化酶 (NSE)是烯醇化酶的一种同工酶，以二聚体的形式存在，特异地定位于神经元及神经内分泌细胞内，分子量为78kDa，等电点为pH4.7，是一种酸性蛋白酶。其三维结构包括大约130个氨基酸的N-端区域，大约300个氨基酸组成8个α/β桶状结构，其中β折叠位于桶状结构的核心部位，为NSE的活性位点所在，周围环绕α螺旋。酶活性中心主要由以下三种碱性氨基酸组成：组氨酸-189、精氨酸-371和赖氨酸-393。NSE所有抗原决定簇都分布在48～96、188～293、399～433氨基酸序列区，位于其三维结构表面，在免疫反应中可刺激机体产生NSE 的单克隆抗体，可用于NSE 的检测。人类的NSE二聚体是不对称的复合物，其中一个亚基含有硫酸根离子和两个镁离子是闭合的构象，可观察到该亚基结合有酶底物或其类似物；而另一个亚基没有结合任何底物或类似物，呈开放的构象。

目前认为NSE是小细胞肺癌 (SCLC)和神经母细胞瘤的敏感指标。

神经母细胞瘤是常见的儿童肿瘤，作为神经母细胞瘤的标志物，NSE对该病的早期诊断有较高的临床应用价值。目前已公认NSE可作为SCLC高相关性，高灵敏性的肿瘤标志物，血清NSE含量改变同SCLC的临床病程具有很好的相关性，监测血清NSE含量，一般在4～12周之前即可预报治疗缓解后SCLC是否复发，显然比X线胸片等检查来得灵敏和方便。NSE水平与其对治疗的反应性之间也有良好的相关性。

NSE是小细胞肺癌细胞株所分泌的一种多肽，小细胞肺癌是一种恶性程度高的神经内分泌系统肿瘤，约占肺癌的25%～30%，SCLC患者血清NSE检出的阳性率可达 65%～100%，NSE被认为是监测小细胞支气管癌的首选标志物。60-81%的小细胞支气管癌患者的NSE升高。血清NSE水平与转移部位或者是否为神经系统转移没关系，与小细胞肺癌的临床进程相平行。NSE是监测小细胞支气管癌疗效与病程的有效标志物，并能提供有价值的预后信息：诊断敏感性为93%，阳性预测值为92%。NSE水平与其对治疗的反应性之间也有良好的相关性。非小细胞肺癌患者如出现血清NSE含量异常增高，则有可能表明患者的预后较差。

2017中国癌症登记年报显示，肺癌是近年发病率和死亡率前三的癌症之一。通过免疫检测定量测定人血浆和血清中的神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量，可辅助用于肺癌的早期诊断、疾病进程检测、治疗效果评价及复发监测等。

目前，国内外知名的体外诊断试剂生产商（如罗氏、康乃格等）提供的神经元特异性烯醇化酶（NSE）校准品主要是冻干品，不仅价格昂贵，而且冻干校准品存在以下缺点：a.复溶给操作者带来了一定麻烦；b. 复溶过程中，水质差异及人为操作误差可能导致校准品复溶后的浓度与靶值有偏差，从而造成临床检测结果的不准确； c. 校准品复溶后不易保存、保存时间短。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量测定用液态校准品，该液态校准品可在2~8℃冷藏条件下保存1年，对神经元特异性烯醇化酶（NSE）的测定具有良好的检测性能。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的神经元特异性烯醇化酶含量测定用液态校准品包括以下组分：