[发明专利]糖化蛋白质的测定

说明书

本发明涉及一种糖化蛋白质的测定，并提供一种适于糖化蛋白质的酶法测定并含有能够使隐色型染料稳定的化合物的试剂。一种试剂，用于基于酶法的糖化蛋白质的测定中，包括：隐色型染料；以及下述式(I)的化合物，在式(I)中，R表示碳数8‑17的烃链。

技术领域

本公开涉及糖化蛋白质的测定，更具体而言，涉及包含隐色型染料的稳定化的糖化蛋白质的测定。

背景技术

血液中的作为葡萄糖与各种蛋白质的反应产物的糖化蛋白质的浓度是中长期的血糖水平的指标。尤其，血红蛋白A1c(HbA1c)、糖化白蛋白、果糖胺等是在临床检查中被频繁测定的物质，并且广泛用于糖尿病的诊断、治疗状态的监视。HbA1c的相对于总血红蛋白的比率HbA1c％除了用于血糖水平的监视之外，还是与糖尿病的诊断相关的重要的检查项目，其中，HbA1c是β链N末端被糖化的血红蛋白。

HbA1c％的测定通过高效液相层析(HPLC，High-Performance LiquidChromatography)法、硼酸亲和法、免疫比浊法、酶法等来进行。其中，酶法试剂作为能够以最低成本测定HbA1c％的方法论而被社会关注。

作为利用酶法试剂的HbA1c％的测定的一个例子，可以举出包含下述(1)～(4)的工序的方法。

(1)使血红蛋白变性，并通过吸光光度法来定量的工序；

(2)通过蛋白酶而加水分解HbA1c的被糖化的N末端附近的工序；

(3)通过酶来氧化由加水分解产生的具有被糖化的N末端的寡肽，从而生成过氧化氢的工序；

(4)通过过氧化氢与过氧化物酶的反应，使作为显色基质的隐色型染料显色，并通过吸光光度法来定量HbA1c的工序。

在如HbA1c那样的微量成分的测定中使用作为高灵敏度显色剂的隐色型染料：DA-64、DA-67。这些显色剂尽管具有优异的灵敏度，但还具有由于暴露于氧气、光、水等而着色的缺点。尤其在测定试剂不是干燥试剂而是溶液试剂的情况下，这样的劣化显著。为了解决该问题，在日本专利第5274590号公报、日本专利第3604198号公报以及日本专利特开2013-104007号公报中公开了以防止显色剂的氧化为目的、在显色剂溶液中添加还原剂而实现稳定化的技术。另外，在日本专利第5616498号公报中，公开了通过表面活性剂的添加来实现显色剂的稳定化的技术。

发明内容

本公开在一个方式中提供试剂以及使用了该试剂的糖化蛋白质的酶法测定，所述试剂适用于糖化蛋白质的酶法测定，并含有能够使隐色型染料稳定的化合物。

本公开在一个方式中涉及一种试剂，用于基于酶法的糖化蛋白质的测定中，包括：隐色型染料；以及下述式(I)的化合物(以下，也称为“本公开涉及的试剂”)。

在式(I)中，R表示碳数8-17的烃链。

本公开在其他一个方式中涉及一种试剂盒，用于通过酶法来测定糖化蛋白质，所述试剂盒包括：含有过氧化物酶的试剂；以及作为不同于该试剂的其他试剂的、本公开涉及的试剂。

本公开在其他一个方式中涉及一种测定方法，其中，所述测定方法是包括下述(1)至(5)的HbA1c的测定方法，所述测定方法包括：使试样与本公开涉及的试剂混合，

(1)使试样中的血红蛋白变性；

(2)通过试样中的糖化血红蛋白与蛋白酶的反应，生成N末端糖化肽；

(3)通过N末端糖化肽与果糖基肽氧化酶的反应，生成过氧化氢；

(4)通过所生成的过氧化氢与过氧化物酶的反应，使隐色型染料显色；

(5)测定显色信号而计算HbA1c量以及血红蛋白量。