[发明专利]用于原发性肝癌早期诊断的GP73检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于原发性肝癌早期诊断的GP73检测试剂盒，包括GP73校准品，包被GP73第一抗体的磁微粒混悬液，样品稀释液，辣根过氧化物酶标记的GP73第二抗体的酶结合物。本发明采用夹心法原理进行检测，用GP73抗体包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记GP73抗体制备酶结合物；通过免疫反应形成抗体—抗原—抗体—酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与GP73的含量成正比。本发明试剂盒引入的样稀组分对样本进行稀释，在最大可稀释倍数范围内稀释结果可信。本发明试剂盒基于磁微粒化学发光法平台制备而成，配套安图生物的全自动免疫测定仪可实现血清、血浆中GP73的快速、自动化检测，分析灵敏度低，线性范围宽，更便于临床应用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，尤其是涉及一种基于磁微粒化学发光法制备的用于原发性肝癌早期诊断的GP73（高尔基体蛋白73）检测试剂盒。

背景技术

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）（以下简称肝癌）是世界范围最常见的恶性肿瘤之一。据最新数据统计，全世界每年新发肝癌患者约七十万，居恶性肿瘤的第五位，并且其恶性程度高，预后差，死亡率为世界肿瘤死亡第二位。我国是全球肝癌发病率最高的国家，每年发病患者数占全球约 55 %。肝癌患者早期无明显症状，一旦出现症状就诊，往往已属于中晚期，失去了有效的治疗时机，发病后一般只能生存 6 个月，被誉为“癌中之王”。因此其早期诊断就显得尤为重要。

AFP是目前HCC筛检中最为常用的一种指标，也被视为HCC血清学诊断的金标准。当前，国际上各临床单位仍建议在肝炎肝硬化等高危人群中每6个月随访一次B超和AFP，以期能及早发现小肝癌，但是AFP用于肝癌早期诊断在肝癌患者中AFP诊断HCC的敏感性和特异性分别为41%～65%和80%～94%，有一定的局限性。

高尔基体蛋白73（GP73）是在研究成人巨细胞性肝炎病原学首次发现的存在于高尔基体的一种 II 型跨膜糖蛋白，相对分子质量为 73 KDa。GP73 在人体多种组织中均表达，但表达强度不一，最高可相差20倍。在胃、肠、前列腺中表达较强，在肾、脾、肺、子宫及睾丸中表达较弱，在心脏中表达最弱。在正常肝脏组织，GP73 主要表达于汇管区的胆管上皮细胞，在肝细胞则无表达或表达很少。但在肝脏疾病中，其在肝细胞及血清中的含量上调，在肝炎中上调水平低，在肝癌中上调水平高。

近年来大量研究证明， GP73 对于肝癌的早期诊断具有较高的敏感性与特异性，其敏感性为74.6%，特异性为 97.4%，在诊断早期HCC时，与AFP的敏感度（25%）相比，GP73水平的敏感度明显更高（62%）。此外， GP73 在HCC患者术后或治疗后有下降趋势，而在肝癌复发时 GP73 重新升高。术后血清GP73水平依旧维持在较高水平者，5 年复发率明显升高。与AFP无直接相关性，联检可提高肝癌的检出率。

文献报道的GP73检测试剂盒的检测方法，主要有酶联免疫法、胶体金法、板式化学发光法，均是手工操作，不仅操作繁琐，效率低，而且不同人操作差别，易引入较大的实验误差。目前有注册文号的GP73试剂盒只有热景公司1家，该试剂盒为酶联免疫法，检测范围50-500ng/mL，分析灵敏度25ng/mL，分析灵敏度偏低，有待提升。

发明内容

本发明提供了一种用于原发性肝癌早期诊断的GP73检测试剂盒，该试剂盒基于磁微粒化学发光法平台制备而成，配套安图生物的全自动免疫测定仪（AutoLumo A2000系列）可实现GP73的快速、自动化检测。此外，本试剂盒的分析灵敏度低（＜1ng/mL），线性范围宽（1-1000ng/mL），更便于临床应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于原发性肝癌早期诊断的GP73检测试剂盒，包括GP73校准品，包被GP73第一抗体的磁微粒混悬液，样品稀释液，辣根过氧化物酶标记的GP73第二抗体的酶结合物。