[发明专利]铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白用于制备细菌检测试剂的用途

说明书

本发明涉及铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白用于制备细菌检测试剂的用途，属于微生物检测技术领域。一株铜绿假单胞菌噬菌体，保藏号为CGMCC No.15569。所述的铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白P069用于制备细菌检测试剂的用途。本发明的有益效果在于：提供了一种能特异性识别铜绿假单胞菌的尾丝蛋白P069，将其作为分子识别试剂，特异性地捕获铜绿假单胞菌，再结合其他分析技术，针对铜绿假单胞菌全细胞进行检测；该分子识别试剂具有检测快速、方便、准确、特异、灵敏、稳定的优点，有望应用于铜绿假单胞菌的现场检测和快速筛查，能够为临床诊断、食品安全和环境检测等领域检测铜绿假单胞菌提供有力的技术支持平台。

技术领域

本发明涉及铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白用于制备细菌检测试剂的用途，属于微生物检测技术领域，尤指以铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白P069作为铜绿假单胞菌的分子识别试剂，将其应用到铜绿假单胞菌的检测的技术。

背景技术

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种发酵型革兰阴性致病菌，是三大条件致病菌之一，在肺囊性纤维化病人中致死率相当高，是医院院内感染和新生儿重症监护感染的主要原因。因此，建立快速、方便、灵敏的铜绿假单胞菌检测方法，对于人体健康、疾病治疗有着重要意义。

铜绿假单胞菌的现有检测方法中，主要包括传统培养、聚合酶链式反应(PCR)、免疫分析等方法。作为“金标准”的传统培养方法准确、灵敏，但耗时、费力；基于致病菌遗传物质的PCR方法能显著地缩短地检测时间，灵敏度高，但PCR需要熟练的操作技巧和核酸提取步骤，并且在苛刻的环境条件下，酶的活性会被抑制；免疫分析方法基于致病菌的抗原成份与抗体结合，具有快速、高特异性等特点，但抗体存在批次差异和交叉免疫原性。

因此，寻找快速、特异、批次稳定、鉴别铜绿假单胞菌检测方法迫在眉睫。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供能特异性识别铜绿假单胞菌的噬菌体尾丝蛋白P069，将其作为分子识别试剂，可快速、方便、特异地检测铜绿假单胞菌。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明首先提供一株铜绿假单胞菌噬菌体，菌株名为PAP1，保藏号为CGMCCNo.15569，分类命名为铜绿假单胞菌烈性噬菌体；该铜绿假单胞菌噬菌体于2018年7月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

所述的铜绿假单胞菌噬菌体用于制备细菌检测试剂的用途。

该铜绿假单胞菌噬菌体PAP1的分离方法如下：加入0.33mg固体CaCl₂至3.0L的医院污水中，然后用0.22μm滤膜滤过除菌，过滤液供噬菌体分离用。将过滤液加入上述150mL对数初期的铜绿假单胞菌LB培养基中，37℃和180rpm条件下过夜培养，滤过除菌。取0.3mL滤液与0.3mL铜绿假单胞菌菌液在室温下孵育15min，然后再加入4.0mL半固体LB培养基，涡旋混匀后，立即倒入固体LB平板上，最后在37℃过夜孵育，直到有噬菌斑出现。