[发明专利]一种白芨组培苗菌根化的方法

说明书

本发明公开了一种白芨组培苗菌根化的方法，包括如下步骤：步骤1，利用白芨的菌根真菌JSNLBJ‑001制备液体菌剂；步骤2，在白芨组培苗移栽前的练苗阶段往白芨组培苗的培养基中加入适宜浓度的液体菌剂，进行菌根化培养；步骤3，待组培苗的茎基部长满菌丝并能观察到其根部有菌丝附着后，将白芨菌根化组培苗从组培瓶里取出，并去除其根部和茎基部的培养基，然后将白芨菌根化组培苗移栽到白芨育苗基质中进行驯化。本发明方法能够为白芨大田栽培提供优质的驯化苗，该方法通过在白芨组培苗移栽前，加入白芨菌根真菌制得的液体菌剂使其组培苗根系菌根化，菌根化的组培苗移栽后，成活率可达99％以上，生长量大，新芽分蘖多且长势旺盛，抗逆性强。

技术领域

本发明涉及一种白芨组培苗菌根化的方法，属于种苗培育技术领域。

背景技术

在自然条件下，兰科植物必须与菌根真菌建立共生关系，形成菌根后，才能完成其正常的生长发育，菌根的形成对兰花来说是必不可少的，菌根真菌向兰科植物提供碳水化合物及其它可能的次生代谢产物，如维生素和激素等物质，因此，从某种意义上讲兰科植物是寄生在真菌上的。白芨为多年生草本兰科植物，其根系结构为典型的菌根结构，其种子无胚乳，在自然条件下需要与之相适应的真菌共生才能萌发，由于组培快繁技术的兴起，解决了种子萌发的难题，现白芨种苗组培快繁已成为其栽培用苗的主要途径之一，但组培苗由于其根系没有相应的菌根真菌与之共生，致使其在驯化移栽过程中，种苗成活率、发芽率低，抗逆性差，因此，一种能够为白芨大田栽培提供优质驯化苗的白芨组培苗的组培方法的开发很有必要。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种白芨组培苗菌根化的方法，该方法通过在白芨组培苗移栽前，利用一株白芨菌根真菌制备成液体菌剂，施用于白芨组培苗培养基中，使白芨组培苗菌根化，白芨组培苗菌根化再进行移栽驯化，菌根化的组培苗在驯化移栽过程中，具有种苗成活率高、发芽率高和抗逆性好的优点。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术手段为：

一种白芨组培苗菌根化的方法，包括如下步骤：

步骤1，利用白芨的菌根真菌JSNLBJ-001制备液体菌剂；

步骤2，在白芨组培苗移栽前的练苗阶段往白芨组培苗的培养基中加入适宜浓度的液体菌剂，进行菌根化培养；

步骤3，待组培苗的茎基部长满菌丝并能观察到其根部有菌丝附着后，将白芨菌根化组培苗从组培瓶里取出，并去除其根部和茎基部的培养基，然后将白芨菌根化组培苗移栽到白芨育苗基质中进行驯化。

其中，步骤1中，菌根真菌为淡紫紫孢菌(Purpureocilliumlilacinum)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物，保藏编号为CGMCC NO：13690。

其中，步骤1中，液体菌剂的制作方法为：将菌根真菌JSNLBJ-001菌株自低温保藏的斜面试管菌种活化后，接种于PDA培养皿中，于24～30℃恒温培养5～10d，然后在菌落边缘打孔成菌饼，将菌饼接入液体培养基中，液体震荡培养7～10d，培养温度26～28℃，转速120～160rpm；待球状菌丝长满液体培养基后，将其放入搅拌机中打碎成悬浮状的液体菌剂。

其中，本发明方法中用于菌根化的白芨组培苗，为可出组培瓶移栽的成品组培苗。

其中，所述液体培养基的组成为：燕麦20～30g/L+葡萄糖25～30g/L+二水氯化钙2.5g/L+马铃薯80～120g/L，培养基pH值为5.8～6.5；其中，马铃薯为其浸出液。液体培养基配制后分装到真菌用三角瓶或培养瓶中，分装量为80～100mL/瓶，然后放入高压灭菌锅内高压灭菌，冷却后接入菌饼。

其中，步骤2中，所述液体菌剂添加量为10～15mL/瓶。