[发明专利]一种红薯组培苗脱毒组培方法

权利要求书

1.一种红薯组培苗脱毒组培方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)温室催芽：在温室里，将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，铺在苗床上，用杀菌剂和杀虫剂消毒后，选择均匀健康的龙9薯块放入温室埋入基质中，保持温度25-35度，湿度40-80％，光照不超过15000勒克斯，发芽10厘米后取3-4厘米茎尖送入实验室；

2)消毒：在超净工作台上，把红薯茎尖切取2cm左右长度，用75％的酒精消毒10秒钟后，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌5-6分钟，使用无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，在解剖镜下用解剖针进行茎尖剥离，切取0.2～0.4mm的茎尖生长点，接种在1/2MS，NAA0.1mg/L固体培养基上，送入培养间，要求温度25-30℃，每天12h、4000～5000lux的光照下培养，产生小植株；

3)检测病毒：茎尖长成苗子后，对获得的小植株用酶联免疫检测法和巴西牵牛指示嫁接法进行脱毒效果的检测，对检测为阴性的植株，在其茎尖部分5叶阶段时再通过酶联免疫检测法测定是否存在红薯羽状斑驳病毒和红薯黄矮病毒；

4)增殖培养：检测过确认没有病毒，就可已进入快繁阶段，一个月左右茎尖长出芽丛，待芽苗长至3厘米大小时将芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到MS，BA1mg/L，NAA0.1mg/L增殖培养基中继续增殖，每瓶放5个芽，每15-25天左右增殖1代；

5)壮苗和生根培养：将增殖苗接种到1/2MS的草莓壮苗培养基中，经过15-20天培养间培养，转接到1/2MS、NAA0.1、0.1％AC的生根培养基中，促使其生根，在温度28-30度条件下进行光照，光照保持4000勒克斯左右，培养20天；

6)驯化炼苗：把生根后的红薯脱毒苗移放温室大棚里炼苗15-20天，温度25-30℃，光照不超过1万勒克斯，20天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；

7)移栽：将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度25-30度，湿度60-90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。

2.根据权利要求1所述的一种红薯组培苗脱毒组培方法，其特征在于：所述步骤7)中将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度26度，湿度80％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。