[发明专利]长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用

说明书

本发明公开了一种长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用，该长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用包括下述工艺步骤：血浆样品收集→血浆样品TotalRNA提取→LncRNAReal‑timePCR引物→Real‑timePCR反应→统计→临床试验。该长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用，通过发现的lncRNA Gm4419和GAS5可作为慢性肾病病人的特异性诊断标志物，其相对于由Wfdc2基因编码的人附睾蛋白4(HE4)的特异性高，且体现在其对患有癌症的患者的检测工作中，lncRNA Gm4419和GAS5在患有癌症的患者的血清中不会增加，不受癌症的影响，使得其均具有较好的敏感度和特异度。

技术领域

本发明涉及长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用技术领域，具体为一种长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用。

背景技术

慢性肾病(CKD)的特征在于肾功能的进行性恶化，CKD起病隐匿，病程相对缓慢，知晓率低，因而通常不能被早期发现、早期诊断、早期治疗，最终可导致病情恶化进展或随病程迁延，发展为终末期肾病(ESRD)，使得需要通过长链非编码RNA对慢性肾病进行诊断与筛查工作。

现有的慢性肾病诊断与筛查手段通过肾活检来对肾脏损害程度及肾纤维化进行检查，由于其组织活检方法的侵入性和相关风险，部分患者会出现出血，疼痛，甚至死亡，导致肾活检不能连续进行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用，以解决上述背景技术中提出一般的慢性肾病诊断与筛查手段通过肾活检来对肾脏损害程度及肾纤维化进行检查，由于其组织活检方法的侵入性和相关风险，部分患者会出现出血，疼痛，甚至死亡，导致肾活检不能连续进行的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用，其特征在于：所述长链非编码RNA在慢性肾病诊断与筛查中的应用包括下述工艺步骤：

(1).血浆样品收集

1)采集外周血1mL(CKD病人组与正常人组)，迅速转入EDTA抗凝管中，通过涡旋或用移液器混匀；

2)然后在1h(室温条件下)或2h(0℃-5℃条件下)内进行下面的操作：800g-900g，0℃-5℃，离心10min-15min；

3)再吸取约0.5mL上清转至洁净的1.5mL离心管中，16000g-16200g，0℃-5℃，离心10min-15min，小心吸取上清到新的离心管中，置于-80℃保存备用。

(2).血浆样品TotalRNA提取

1)在-80℃冰箱取出血浆样本，冰上融化；

2)取0.2ml-0.3ml样本加入0.75mlLSReagent，通过涡旋或用移液器混匀吹打混匀，静置5min-15min；

3)然后加入0.2ml-0.3ml氯仿，充分震荡15s-20s，常温静置5-15min；

4)0℃-5℃，12000xg-12200xg离心15min，移取上清液至新的1.5ml离心管；

5)向新离心管内加入1ulGlycogen(10ug/ul)，并通过涡旋或用移液器充分混匀；

6)再加入0.5ml-0.8ml异丙醇，混匀，常温孵育10min-15min；

7)0℃-5℃，12000xg-12200xg离心10min-15min，弃上清液；

8)加入1ml-2ml的75％乙醇，混匀；

9)0℃-5℃，7500xg离心5min-15min，弃上清液；