[发明专利]获得和维持纯化或富集的哺乳动物神经干细胞群和/或神经祖细胞群的培养方法

权利要求书

1.一种分离的可扩增的人神经细胞，其中所述细胞为祖细胞或干细胞，

其中，所述细胞已在有效富集可扩增的神经细胞的条件下培养，所述条件包括，含有有效量的生长添加剂的培养基、两种生长因子和一种存活因子，其中所述两种生长因子是血小板衍生生长因子(PDGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，所述的存活因子为胰岛素样生长因子(IGF)，

所述细胞保持其分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，

其中所述细胞保持其在整个后续传代中有效分化为少突胶质细胞谱系细胞的能力，

其中所述细胞表达细胞表面抗原CD133，CD140α，A2B5和PSA-NCAM，

其中所述可扩增的人神经细胞是在不违反社会公德的情况下获取的。

2.根据权利要求1的分离的可扩增的人神经细胞，其特征在于所述细胞已在ATCC保藏，保藏号为PTA-12291。

3.根据权利要求1的可扩增的人神经细胞，其特征在于所述两种生长因子存在的浓度为至少5ng/ml的PDGF和至少2.5ng/ml的bFGF以分离可扩增的人神经细胞。

4.根据权利要求1的可扩增的人神经细胞，其特征在于所述一种存活因子存在浓度至少为1ng/ml的IGF。

5.根据权利要求1的可扩增的人神经细胞，其特征在于所述细胞可以冷冻和解冻而不失去其在整个后续传代中分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，以及其至少表达细胞表面抗原CD133，CD140α，A2B5和PSA-NCAM的能力。

6.一种体外培养可扩增的神经细胞的方法，其中所述细胞是分离自哺乳动物中枢神经系统的祖细胞或干细胞，其中所述细胞保持其分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力以及其有效分化为少突胶质细胞谱系细胞的能力，所述方法包括：

a)从人胎儿神经组织分离和离解至少一个细胞，

b)在温度为37℃，含有1-20％O₂和5％CO₂的气体环境中，化学定义的无血清培养基中培养细胞，所述培养基包含：

-至少5ng/ml PDGF-AA

-至少0.5ng/ml bFGF，和

-至少10μM的1-硫代甘油，

c)从b)传代细胞以获得所述表达细胞表面抗原CD133，CD140α，A2B5和PSA-NCAM的可扩增的人神经细胞，

其中人胎儿神经组织是在不违反社会公德的情况下获取的。

7.体外培养物，其包含从哺乳动物中枢神经系统获得的至少一个分离的神经细胞，其中所述分离的细胞浸没在化学定义的无血清培养基中，该培养基包含：

-至少5ng/ml的PDGF-AA，

-至少5ng/ml的bFGF，和

-至少10μM 1-硫代甘油，

其中从哺乳动物中枢神经系统获得的至少一个分离的神经细胞是在不违反社会公德的情况下获取的。

8.神经干细胞药物组合物，其包含权利要求1所述的分离的可扩增的人神经细胞。

9.神经干细胞药物组合物，其包含可扩增的神经细胞，所述可扩增的神经细胞经权利要求6的方法在体外培养。

10.一种培养基，其特征在于，所述培养基包括：

-至少5ng/ml PDGF-AA

-至少0.5ng/ml bFGF，和

-至少10μM的1-硫代甘油，优选地，所述培养基为化学定义的无血清培养基。