[发明专利]分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体3A10的杂交瘤细胞系及其应用

说明书

本发明公开了分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体3A10的杂交瘤细胞系及其应用。本发明用口蹄疫非结构蛋白为抗原免疫鼠通过细胞融合技术筛选最终筛选获得一株微生物保藏编号为CGMCC NO.16213的稳定分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单抗的杂交瘤细胞系，其分泌的单抗广谱性好、保守性高、亲和力强，与血清竞争性强，可作为阻断ELISA检测方法中的检测抗体准确区分口蹄疫自然感染动物与免疫接种动物。本发明还提供了采用该单抗为检测抗体建立的阻断ELISA检测试剂盒，采用该一种该检测试剂盒即可检测任何动物种属的血清，跨越了种间屏障，具有可靠性高、应用性宽、广谱性好、检测更为快捷方便等优点。

技术领域

本发明涉及口蹄疫病毒单克隆抗体以及分泌该口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系，本发明尤其涉及口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体3A10以及分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其应用，本发明进一步涉及它们在区分口蹄疫自然感染动物与免疫接种动物中的应用，属于口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体及其应用领域。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的，主要侵害牛、猪、羊等家畜及多种野生偶蹄动物的高度接触性传染病，人也可以感染。该病引起幼畜死亡、产奶量下降、肉食减少、肉品下降、动物的生产性能降低，而且具有极强的传染性，可形成大范围流行，造成巨大的经济损失。口蹄疫病毒属于微RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，为单股正链RNA，其基因组RNA全长约8.5kb。根据免疫原性，口蹄疫病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asial共7个血清型及65个以上的亚型，各血清型之间无交叉免疫保护。目前，中国主要流行O型和A型FMD。

预防和控制口蹄疫的关键是高效疫苗的应用以及准确的诊断方法。传统灭活疫苗的免疫接种是预防和控制口蹄疫的最有效手段，由于现有的检测方法不能准确区分口蹄疫自然感染动物与免疫接种动物，导致口蹄疫不能得到有效的控制。

现有技术用于检测口蹄疫病毒的单克隆抗体均不同程度的存在以下几方面的缺陷：

(1)单克隆抗体所针对的表位没有进行鉴定，不能确定单抗广谱性的程度：现有的单抗所针对的表位序列及其关键氨基酸或重要氨基酸等情况均不清楚，如果关键氨基酸和重要氨基酸在毒株间有变异，其广谱性的程度就会改变，不能确保其对口蹄疫毒株的广谱性，相应的缺乏真正的应用价值；

(2)单克隆抗体广谱性差：单抗针对的抗原表位保守性较差，导致其与口蹄疫的一些毒株不发生反应；

(3)单克隆抗体的竞争性差：有些单抗与口蹄疫感染血清的竞争能力不好，导致不能建立有效的阻断ELISA检测试剂盒。没有竞争性或者竞争性较差的单克隆抗体只适合用于包被ELISA板来捕获FMDV 3ABC抗原，然后只能加待检猪、牛或者羊血清中的一种，最后用HRP标记抗猪、牛或者羊的IgG抗体。用这种没有竞争性或者竞争性较差的单克隆抗体建立的口蹄疫鉴别诊断方法术士繁琐，更严重的是不能跨越动物种间屏障，不能在一个反应体系中检测任何动物种属的血清。

由于现有的用于检测口蹄疫病毒的单克隆抗体不同程度的存在上述缺陷，导致这些单抗均不能建立有效的阻断ELISA术式，用这些单抗所建立的ELISA检测试剂盒，除了存在检测敏感性低、广谱性(即针对表位的保守性)差外，更为严重的是，每检测一种动物就需要建立一种检测试剂盒，缺乏实际的应用价值。因此，研制一种广谱性好、保守性高、亲和力强的口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体并对其表位进行精确鉴定，这对于建立准确区分口蹄疫自然感染动物与免疫接种动物的阻断ELISA检测试剂盒等具有重要意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供一株高效、稳定分泌口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系；

本发明的目的之二是提供由所述杂交瘤细胞系分泌的抗口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体，其广谱性好、保守性高、亲和力强；

本发明的目的之三是精确鉴定口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体所识别的抗原表位；