[发明专利]一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法在审
| 申请号： | 201811122209.X | 申请日： | 2018-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN109136171A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 肖昊;胡胜兰;王丽;杨雪芬;高开国;蒋宗勇 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 成都天汇致远知识产权代理事务所(普通合伙) 51264 | 代理人： | 韩晓银 |
| 地址： | 510640 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乳腺上皮细胞 孔板 完全培养基 沉淀 胰蛋白酶消化 混合溶液 倒置 体积比 重悬液 预热 滴入 孵育 凝胶 重悬 配制 细胞 保留 | ||
1.一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将孔板于37℃下预热；
(2)将10代以前的猪乳腺上皮细胞用胰蛋白酶消化成单细胞后离心，弃去上清，保留沉淀；
(3)将沉淀用Matrigel与Advanced DMEM/F12完全培养基按照体积比1:1于0～10℃配制的混合溶液重悬，并调整猪乳腺上皮细胞浓度为1×104～5×104cell/ml；
(4)按照30-40ul每滴的量将重悬液滴入孔板，将孔板倒置后于37℃孵育30～40min使其形成凝胶；
(5)在孔板中加入Advanced DMEM/F12完全培养基继续培养2-3天，每隔一天更换一次Advanced DMEM/F12完全培养基。
2.根据权利要求1所述的一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中离心步骤的控制参数为：转速为800～1200rpm，离心3～5min。
3.根据权利要求1所述的一种3D培养猪乳腺上皮细胞的方法，其特征在于，所述Advanced DMEM/F12完全培养基的组成为：Advanced DMEM/F12基础培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、胰岛素、氢化可的松和上皮生长因子，其中Advanced DMEM/F12基础培养基和胎牛血清的体积比为9:1，青霉素、链霉素、胰岛素、氢化可的松和上皮生长因子在AdvancedDMEM/F12完全培养基中的浓度分别为50μg/ml、4μg/ml、10ug/ml、1ug/ml、10ng/ml。
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