[发明专利]一种利用磁性纳米微球对喷施雾滴飘失或沉积特性检测的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种利用磁性纳米微球检测喷施雾滴飘失或沉积特性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将过渡探针加到喷施液中作为示踪剂；

（2）步骤（1）的喷施液喷施后，收集待喷施的靶标表面的喷施液，将磁性纳米微球加到收集的喷施液中，利用磁性纳米微球富集过渡探针；所述磁性微球上键合有固定探针，该固定探针能够与作为示踪剂的过渡探针特异性结合；

（3）将带有生物素或者酶标记的显色探针加入到步骤（2）含有磁性纳米微球的收集的喷射液中，通过杂交技术结合在对应的过渡探针上，显色处理后，通过紫外可见分光光度计读出吸光值，标准曲线换算后，计算雾滴飘失或沉积量；

所述过渡探针、固定探针和显色探针均为特征序列的单链脱氧核糖核酸；所述过渡探针不经生物素修饰，具有能够分别与上述固定探针和显色探针互补配对的核苷酸序列，并且固定探针与显色探针不特异结合，若固定探针是5’氨基修饰，则显色探针为3’生物素标记，若固定探针是3’氨基修饰，则显色探针为5’生物素标记；

所述过渡探针的长度为24-50 nt，固定探针的长度为12-25 nt，显色探针的长度为12-25nt。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述磁性纳米微球，是通过以下方式制备得到的：磁性纳米微球用纯水和DMF分别利用超声清洗3次后，加入0.02-0.15 M NaCl溶液，磁性纳米微球改性剂溶液，1-6 M NaOH溶液, 并调节pH至6-8，25℃反应3-5 h，用无水DMF洗涤，接着向体系中加入无水DMF和10-20% EDC后，25℃反应3-5h,再用无水DMF洗涤、无水DMAC洗涤，加入含有0.025-0.2 mM固定探针的NaHCO₃溶液中浸泡1-3 h；再加入的1-6M的NaOH溶液浸泡膜1-3 h，清洗，晾干后即得带有固定探针的磁性纳米微球。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磁性纳米微球其磁核为三氧化二铁、四氧化三铁、氧化亚铁或铁钡合金带有超顺磁性的金属材料；其表面修饰为氨基或羧基；磁性纳米微球粒径为10-200 nm。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磁性纳米微球粒径为100 nm。

5.如权利要求2所述的检测喷施雾滴飘失或沉积特性方法，其特征在于，所述磁性纳米微球改性剂溶液为长链的双羧酸酐溶液；所述喷施雾滴为农药、液体肥料或其他液体制剂。

6.如权利要求1所述的检测喷施雾滴飘失或沉积特性方法，其特征在于，步骤（1）喷施液中过渡探针的最终浓度为0.025-0.1 μM。

7.一种检测喷施雾滴飘失或沉积量的试剂盒，其特征在于，含有磁性纳米微球，过渡探针、显色探针；所述磁性纳米微球为键合有固定探针的磁性纳米微球，所述过渡探针、固定探针和显色探针均为特征序列的单链脱氧核糖核酸；固定探针长度为12-25 nt，其一端加氨基或羧基修饰，能够与磁性纳米微球的羧基或氨基键合；若固定探针是5’标记，则显色探针为3’生物素标记，若固定探针是3’标记，则显色探针为5’生物素标记；

所述过渡探针的长度为24-50 nt；所述显色探针的长度为12-25nt，能够与过渡探针特异结合，不能与固定探针特异结合。