[发明专利]一种体外提高CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的培养方法

说明书

本发明涉及细胞免疫治疗领域，特别涉及一种提高体外CAR‑T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的方法，尤其涉及使用Retronectin试剂作为细胞活化试剂。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗领域，特别涉及一种提高体外CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的培养方法，尤其涉及使用Retronectin 试剂作为细胞活化试剂。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T，Chimeric antigen receptor T cell)是指通过基因修饰技术，将带有特异性抗原识别结构域及T细胞激活信号的遗传物质转入T细胞，使T细胞通过直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而激活，通过释放穿孔素、颗粒酶素B等直接杀伤肿瘤细胞，同时还通过释放细胞因子募集人体内源性免疫细胞杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的，而且还可形成免疫记忆T细胞从而获得特异性的抗肿瘤长效机制。

目前，全球备案可查的122项CAR-T临床试验中，针对CD19这一个靶点的有59项，约占48％。可见CD19是被研究最为广泛和理想的CAR-T治疗靶点。2012年，6岁的急性淋巴细胞白血病小女孩Emily 在无药可医的情况下，尝试了Carl June实验室的研究性CD19CAR-T细胞治疗，治疗后她一直健康地生存至今。2017年，美国FDA批准了唯一两种上市CAR-T细胞药物均为CD19CAR-T细胞——Kymriah 和Yescarta，前者用于治疗高达25岁的患有难治性或复发的急性淋巴细胞性白血病(ALL)的患者，后者用于难治性或复发的大B细胞淋巴瘤成人患者。

随着CD19CAR-T细胞药物的上市，CAR-T治疗的临床转化和生产产业化已经成为肿瘤免疫领域中新的研究热点。我国CAR-T研究也呈现蓬勃发展的态势，已有众多研究机构及制药公司投入到了以CD19 为代表靶点的CAR-T细胞产品的研发中，已有多家机构递交了CD19 CAR-T细胞治疗产品的临床试验申请。

尽管CAR-T细胞治疗不断取得令人鼓舞的进展，但它仍是一个新兴领域，存在起始材料差异大、制备工艺不成熟、生物学效力以及安全性评价复杂等问题。因此，如何提高CD19CAR-T细胞治疗产品的安全性、有效性、质量可控性以及提升产品工艺一致性成为研究者们亟待解决的问题。本专利着重于对CD19CAR-T细胞治疗有效性的提高，即在体外细胞培养阶段，提高CD19CAR-T细胞对于CD19阳性靶细胞的杀伤率。

CN1656215A是日本宝生物工程株式会社(TAKARA)申请的中国专利，其公开了一种纤连蛋白及其片段，其可以诱导、维持和扩增细胞毒性淋巴细胞，尤其是扩增CD8阳性细胞的比率。根据该专利，宝生物开发了Retronectin重组人纤粘连蛋白试剂，Retronectin试剂已被广泛使用，以提高逆转录病毒和慢病毒基因转移方法进哺乳动物细胞中。其能显着地增加了T细胞的扩增效率。

CN107142245A公开了用Retronectin试剂培养CIK细胞的方法，其可以提高CIK的扩增率，尤其是CD3+、CD56+效应细胞的获得数量，从而能提高CIK细胞的杀伤活性。

至今未有Retronectin试剂对于CD19CAR-T细胞增殖效果的报道，本发明人还意外地发现，经过Retronectin试剂处理培养的CD19 CAR-T细胞自身对于CD19阳性靶细胞的杀伤率大幅提高。

发明内容

本发明提出一种提高体外CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的方法，该方法的技术方案为：

一种体外提高CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的培养方法，其特征在于，在T细胞活化阶段用Retronectin试剂处理；

本发明进一步提供Retronectin试剂用于提高体外CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的用途，以及Retronectin试剂在制备提高体外CAR-T细胞对于CD19阳性细胞杀伤率的制剂方面的用途，