[发明专利]抗肿瘤嵌合蛋白、抗肿瘤疫苗和鼻粘膜给药的抗肿瘤疫苗

说明书

本发明属于生物医药的技术领域，尤其涉及抗肿瘤嵌合蛋白、抗肿瘤疫苗和鼻粘膜给药的抗肿瘤疫苗。本发明提供了一种抗肿瘤嵌合蛋白，包括：第一多肽，包括用于增强免疫反应的淋巴因子序列和霍乱毒素的CTA2亚基序列；第二多肽，包括霍乱毒素的CTB亚基序列和肿瘤特异性抗原表位肽序列；所述第一多肽的霍乱毒素的CTA2亚基和所述第二多肽的霍乱毒素的CTB亚基相互嵌合得到抗肿瘤嵌合蛋白。本发明提供了抗肿瘤嵌合蛋白、抗肿瘤疫苗和鼻粘膜给药的抗肿瘤疫苗，用于解决现有技术中的肿瘤疫苗免疫原性差的技术缺陷。

技术领域

本发明属于生物医药的技术领域，尤其涉及抗肿瘤嵌合蛋白、抗肿瘤疫苗和鼻粘膜给药的抗肿瘤疫苗。

背景技术

肿瘤疫苗是近年来肿瘤学研究的热点，其通过肿瘤特异性抗原或抗原多肽的给药，激活、恢复或加强机体抗肿瘤的免疫反应，进而杀伤、清除表达肿瘤特异性抗原的肿瘤细胞。然而，肿瘤疫苗研制存在着一个主要问题，就是肿瘤抗原的免疫原性较弱，不能被免疫系统识别并呈递以激活毒性T淋巴细胞(CTL)，发挥不了免疫治疗的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能主动诱发CTL反应的，安全且具免疫原性的抗肿瘤嵌合蛋白、抗肿瘤疫苗和鼻粘膜给药的抗肿瘤疫苗。

本发明提供了一种抗肿瘤嵌合蛋白，包括：

第一多肽，包括用于增强免疫反应的淋巴因子序列和霍乱毒素的CTA2亚基序列；

第二多肽，包括霍乱毒素的CTB亚基序列和肿瘤特异性抗原表位肽序列；

所述第一多肽的霍乱毒素的CTA2亚基和所述第二多肽的霍乱毒素的CTB亚基相互嵌合得到抗肿瘤嵌合蛋白。

本发明巧妙利用了霍乱毒素(cholera toxin，CT)的结构特点，霍乱毒素是从霍乱弧菌分离得到的毒素蛋白，可以致人严重脱盐引起腹泻，一个霍乱分子由5个相同的B亚基(CTB)和一个A亚基(CTA)组成，CTA通过疏水作用与CTB5形成稳定的六聚体，CTA包括CTA1和CTA2，CTA1具有致病性。其中，CTB的基因库登录号为GenBank：AND74811.1，在设计时，将天然的CTB前端信号肽切除，使得CTB在大肠杆菌细胞内大量表达为包涵体形式。此外，CTB的C端有5个融合表位连接处，因此，可以提高连接表位的免疫原性，增大免疫强度。其中，CTA2亚基非共价紧密结合于CTB五聚体亚基的中心区，形成支架将GM-CSF与CTB五聚体亚基嵌合在一起。

需要说明的是，所述第一多肽是将淋巴因子通过连接肽与CTA2连接，连接肽为常用的连接肽，例如：GGGGS或ASGG。

需要说明的是，所述第二多肽是将霍乱毒素的CTB通过连接肽与肿瘤特异性抗原表位肽序列连接，连接肽为常用的连接肽，例如：GGGGS或ASGG。

作为优选，所述霍乱毒素的CTB亚基序列如SEQ ID No:1所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸，与所述霍乱毒素的CTB亚基序列至少有80％同源性、且能与所述霍乱毒素的CTA2亚基相互结合。

作为优选，所述霍乱毒素的CTA2亚基序列如SEQ ID No:2所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸，与所述霍乱毒素的CTA2亚基序列至少有80％同源性、且能与所述霍乱毒素的CTB亚基相互结合。

作为优选，所述淋巴因子选自粒-单核细胞集落刺激因子。

作为优选，所述粒-单核细胞集落刺激因子如SEQ ID No:3所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸，与所述粒-单核细胞集落刺激因子至少有80％同源性、且功能相同或相似的氨基酸序列。