[发明专利]一种高产红景天苷的工程菌及其应用

权利要求书

1.一种高产红景天苷的工程菌，其特征在于：它是将酿酒酵母菌中的ARO4基因编码第229位氨基酸的密码子突变为编码亮氨酸的密码子、ARO7基因第141位甘氨酸的密码子突变为编码丝氨酸的密码子、ARO3基因第222位赖氨酸的密码子突变为编码亮氨酸的密码子的重组酵母菌。

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于：所述ARO4基因第229位的密码子为TTG，所述ARO7基因第141位的密码子为AGT；第222位的密码子为CTA。

3.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于：所述重组酵母菌中，基因RIC1、基因pHA2和/或TRP2失活；优选地，基因RIC1、基因pHA2和/或TRP2分别突变为SEQ ID NO：4～6所示的序列。

4.根据权利要求1或2所述的工程菌，其特征在于：所述重组酵母菌中包含携带UGP1，PGM和/或RrU8GT33的严谨型质粒pRS413质粒；优选地，所述重组酵母菌中还包含携带ARO10、ARO2和/或ARO1的整合型pRS425质粒。

5.权利要求1～4任意一项所述的工程菌在生产红景天苷中的应用。

6.一种制备红景天苷的方法，其特征在于：它是采用权利要求1～4任意一项所述的工程菌发酵制备。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)取权利要求1～4任意一项所述的工程菌，培养，得到酿酒酵母种子液；

(2)将酿酒酵母种子液接种到发酵培养基中，发酵，得发酵液；

(3)分离纯化。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(1)的工艺为：取工程菌，接种到SC液体培养基中，28～32℃、100～300rpm摇床培养12～36h，优选30℃、200rpm摇床培养24h。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，发酵的条件为：将酿酒酵母种子液接种到发酵培养基中后，OD600为0.1～0.3，优选为0.2；发酵的温度为28～32℃，有选为30℃，搅动速度100～300rpm，优选为200rpm；控制控制pH为5.3～5.8，优选为5.5；空气流速为2～6L/min，优选为4L/min；发酵时间为120～170h，优选发酵时间为144h；

和/或，步骤(2)中，所述发酵培养基为SC培养基，在发酵的过程中连续添加葡萄糖溶液，保持发酵培养基中葡萄糖浓度为10-20g/L和/或，步骤(3)中，所述分离纯化方法为柱层析方法。

10.根据权利要求9所述的方法其特征在于：所述柱层析方法为：将发酵液用HP20大孔吸附树脂吸附，后用清水洗涤树脂，再依次用40％乙醇、70％乙醇洗脱，得红景天苷的纯品；优选地，上样体积：柱体积为3：1；吸附完成后用3倍柱体积的水洗涤树脂，后用20倍柱体积的40％乙醇，再40倍柱体积的70％乙醇洗脱。