[发明专利]一种抗尿素酶B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用

说明书

本发明公开了一种抗尿素酶B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用，涉及纳米抗体技术领域。本发明公开的抗尿素酶B亚单位的纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该纳米抗体具有与尿素酶B亚单位特异性结合的活性，可以用于检测幽门螺旋杆菌与抑制幽门螺旋杆菌的活性；此外该纳米抗体还具有分子量小、亲和力高、结构和性能稳定等特点。

技术领域

本发明涉及纳米抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗尿素酶B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是一种全世界范围的人类感染病原菌，感染者达到世界人口的一半以上。Hp与慢性胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)和 胃癌等多种疾病相关，对人类健康构成严重危害。世界卫生组织已将其列为一类致癌因子。1998年，日本学者Watanadbe等首先报道Hp感染的蒙古沙鼠可致胃癌发生，为Hp感染能诱发胃癌提供了直接证据。药物治疗Hp根除率低，费用昂贵，而且不能有效阻止Hp的再感染，耐药菌株的增加也使药物治疗Hp面临越来越复杂的难题。疫苗是控制感染性疾病最为经济有效的办法，通过疫苗刺激机体产生不同于自然感染导致的特异性免疫应答，可以达到预防或者治疗Hp感染的目的。

尿素酶占地总蛋白的5%-10%，含量最为丰富，能够水解代谢尿素，释放氨中和胃酸，使细菌增强抵抗胃部强酸，穿过胃粘液层到达粘膜表面；能够激活单核吞噬细胞和刺激炎性 细胞因子的产生，在体外试验中对人胃上皮细胞仍具有毒性作用。尿素酶对Hp在胃内的寄生和致病都起重要作用，是定植因子又是毒力因子，是Hp疫苗研究中一种重要的蛋白质。尿素酶分子量为550KD左右，其单体由A、B两个亚单位组成，呈六聚体。A、B两个亚单位的分子量分别为30KD和66KD左右，在尿素酶中比例为1:1。尿素酶活性在Hp感染中具有重要作用，缺失尿素酶活性的Hp在动物模型中不能导致感染，中和尿素酶活性的抗体可能在抵抗Hp定植中 起关键作用。尿素酶抗体，尤其是能够中和尿素酶活性的抗体，才在抵抗Hp感染中发挥着主要作用。

羊驼血清中存在的一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体（heavy-chainantibody，hcAb）。单域重链抗体（single domain antibody，sdAb）是指仅由重链抗体可变区（Variable region）组成的基因工程抗体，又称为VHH抗体（variable domain of heavychain of heavy-chain antibody，VHH antibody）或纳米抗体（Nanobody，Nb）。与传统抗体相比，单域抗体具有分子量小，抗逆性强，在强酸条件下仍具有高活性，因此非常适合中和胃中的尿素酶，从而抑制幽门螺旋杆菌。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗尿素酶B亚单位的纳米抗体。

本发明的另一目的在于提供一种分离的核酸分子。

本发明的另一目的在于提供一种载体。

本发明的另一目的在于提供一种宿主细胞。

本发明的另一目的在于提供一种制备上述纳米抗体的方法。

本发明的另一目的在于提供一种试剂盒。

本发明的另一目的在于提供上述的纳米抗体的应用。

本发明是这样实现的：

本发明的一方面涉及一种抗尿素酶B亚单位的纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，本发明的纳米抗体的氨基酸序列并不限于SEQ ID NO.1所示的序列，其还可以是在SEQ ID NO.1所示的序列上经过一个或多个氨基酸残基的替换和/或删除得到的，且具有与SEQ ID NO.1相同生物活性例如与尿素酶B亚单位特异性结合的活性或者是活性加强或者活性减弱的衍生序列。这类衍生序列也属于本发明的保护范围。