[发明专利]一种pH响应型自辅因子DNAzyme ZnO纳米探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种pH响应型自辅因子DNAzymeZnO纳米探针的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将ZnO纳米粒子的Tris溶液与多巴胺Tris溶液混合后，超声处理设定时间；

2)离心去除多余的多巴胺溶液，将ZnO纳米粒子分散在DEPC处理的超纯水中，得到混合液A；

3)将混合液A与设定浓度的识别发夹DNA、报告发夹DNA混合后，涡旋设定时间，离心去除多余发夹DNA，即得；所述识别发夹DNA为H1和H3；所述报告发夹DNA为H2和H4，H1序列为CAGACTGATGTTGATCCGAGCCGGTCGAAATAGTGGGTAAAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTA，H2序列为FAM-CCACCACATACTAAAACACCCACTATrAGTCAACATCATTACGAGGCGGTGGTGG-BHQ1，H3序列为TCGATTTTGGGGTGTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGGGTAAAATACACCCCAAAATCGAAGCACTTC，H4序列为Cy5-CCACCACATACTAAACACCCACTATrAGCACCCCAATTACAAACCGTGGTGG-BHQ2。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，ZnO纳米粒子的Tris溶液的pH值为8.5。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，ZnO纳米粒子与多巴胺的质量浓度比为2:1。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，ZnO纳米粒子的Tris溶液的浓度为1mg/mL。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，多巴胺Tris溶液的pH值为8.5。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，超声处理的时间为1h。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤3)中，涡旋的时间为1h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括将制备得到的ZnO纳米探针分散在pH值为7.4的HEPES缓冲溶液中的步骤。

9.如权利要求1-8任一项所述制备方法制备得到的pH响应型自辅因子DNAzymeZnO纳米探针。

10.如权利要求1-8任一项所述制备方法制备得到的pH响应型自辅因子DNAzymeZnO纳米探针在microRNA的多重检测和活细胞成像中的应用。

11.如权利要求1-8任一项所述制备方法制备得到的pH响应型自辅因子DNAzymeZnO纳米探针检测microRNA的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：将ZnO纳米探针与pH值为5.0的Tris缓冲溶液混合，孵育设定时间后，加入HEPES缓冲溶液、DEPC处理的超纯水和microRNA样品，孵育后进行荧光测量。

12.如权利要求1-8任一项所述制备方法制备得到的pH响应型自辅因子DNAzymeZnO纳米探针应用于活细胞成像的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：将待测细胞分散在玻璃皿中，在37℃下5％的CO₂气氛中孵育24h；然后加入用细胞培养基稀释的ZnO纳米探针，再在37℃下孵育4h；最后，用PBS缓冲溶液将细胞清洗后成像。