[发明专利]一种利用UPLC-MS/MS同时测定酸枣仁中9种化学成分的方法

权利要求书

1.一种同时测定酸枣仁中9种化学成分的方法，包括：步骤(1)样品的制备和步骤(2)采用UPLC-MS/MS法进行检测；

步骤(1)样品的制备采用包括如下步骤的方法：

a)对照品溶液的配制：以乌药碱、木兰花碱、维采宁Ⅱ、斯皮诺素、当药黄素、山奈酚-3-O-芸香糖苷、6”'-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B标准品为对照品，加甲醇溶解，混匀，得到混合对照品母液；加甲醇稀释，得到一系列各标准品浓度已知的混合对照品溶液；

b)供试品溶液的制备：

首先对样品粉末进行脱脂处理，然后以乙醇为溶剂回流提取脱脂后的样品，滤过，收集滤液，并用乙醇洗涤滤渣，合并洗液与滤液，除去其中的溶剂得到残渣，用甲醇溶解残渣，过滤，取续滤液，得到供试品溶液；

步骤(2)检测所用超高效液相色谱条件如下：

色谱柱为：ACQUITYHSS T3柱；

流动相采用乙腈为A相，含0.1％甲酸的水为B相，其中，0.1％甲酸是甲酸相当于水的体积比；

洗脱方式为梯度洗脱；

所述梯度洗脱的程序如下：

0～2min：A相占流动相总体积的17％；

2～4min：A相的体积分数由17％增加至19％；

4～10min：A相的体积分数由19％增加至33％；

10～15min：A相的体积分数由33％增加至100％；

所述步骤(2)检测所用质谱条件如下：

离子源：ESI源；正、负离子切换的扫描模式；扫描模式：MRM；雾化器流量：2.0L/min；干燥气流量：10.0L/min；加热气流量：10.0L/min；接口电压：4.0KV；接口温度：300℃；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；CID气：270KPa；

各成分对应的检测离子对、裂解电压及碰撞能量如下：

乌药碱：检测离子对(m/z)286.0/194.1、裂解电压42V、碰撞能量46eV；

木兰花碱：检测离子对(m/z)342.1/222.3、裂解电压35V、碰撞能量30eV；

维采宁Ⅱ：检测离子对(m/z)595.3/325.3、裂解电压115V、碰撞能量48eV；

斯皮诺素：检测离子对(m/z)609.5/327.3、裂解电压98V、碰撞能量35eV；

当药黄素：检测离子对(m/z)447.2/267.2、裂解电压38V、碰撞能量35eV；

山奈酚-3-O-芸香糖苷：检测离子对(m/z)595.2/287.3、裂解电压35V、碰撞能量30eV；

6”'-阿魏酰斯皮诺素：检测离子对(m/z)785.4/327.3、裂解电压76V、碰撞能量46eV；

酸枣仁皂苷A：检测离子对(m/z)1205.3/1073.8、裂解电压32V、碰撞能量46eV；

酸枣仁皂苷B：检测离子对(m/z)1043.3/911.1、裂解电压50V、碰撞能量37eV。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：a)中，所述混合对照品母液中，乌药碱、木兰花碱、维采宁Ⅱ、斯皮诺素、当药黄素、山奈酚-3-O-芸香糖苷、6”'-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B标准品的浓度依次为：15.18μg/mL、60.48μg/mL、9.00μg/mL、36.94μg/mL、2.02μg/mL、3.06μg/mL、20.94μg/mL、25.70μg/mL、6.07μg/mL；

b)中，所述脱脂处理的操作为：以石油醚为溶剂加热回流提取样品粉末，滤过，收集药渣，待药渣挥去溶剂，得到脱脂后的样品；

其中，所述石油醚为：沸程为60～90℃的石油醚；

所述样品粉末为酸枣仁粉末；

所述样品粉末与石油醚的配比为：2g：70-100mL；

所述加热回流提取的时间为4-5；

所述乙醇可为体积浓度70％的乙醇；

乙醇与所述样品粉末的配比为：30-50mL：2g；

所述乙醇为溶剂加热回流提取的时间为2-3h；

洗涤滤渣用乙醇为体积浓度70％的乙醇。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述超高效液相色谱条件中，色谱柱为：ACQUITYHSS T3柱，150mm×2.1mm，1.8μm；

流动相的流速为0.15mL/min；柱温为40℃；进样量为3μL。