[发明专利]一种抗人促绒毛膜促性腺激素β亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用

说明书

本发明公开了一种抗人促绒毛膜促性腺激素β亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用，涉及纳米抗体技术领域。本发明公开的抗人促绒毛膜促性腺激素的纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该纳米抗体具有与人促绒毛膜促性腺激素β亚单位特异性结合的活性，可以用于检测人促绒毛膜促性腺激素β亚单位，可替代传统单克隆抗体与多克隆抗体；此外该纳米抗体还具有分子量小、亲和力高、结构和性能稳定等特点，可耐受高温，高盐等苛刻条件，提高了抗体的货架期。

技术领域

本发明涉及纳米抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗人促绒毛膜促性腺激素β亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用。

背景技术

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生的一种糖蛋白，由α和β二个单位通过离子键和疏水键结合在一起。α亚单位是垂体前叶激素所共有,它与FSH、LH、TSH的α亚单位结构相似。β亚单位的结构与LH等的β亚单位不同，在免疫活性上可予区别。血中β亚单位大部分以全分子形式存在，游离态的β亚单位(F-13_HCG)占HCG的I～5％左右。血中游离态的β亚单位是在受孕后6～8天产生，50～80天达到高峰，以后平稳下降，直至孕18周左右稳定于一定浓度。

唐氏综合征又称先天愚型，21-三体综合征，是最常见的染色体疾病和弱智的病因，新生儿中发病率约为1/700左右。根据染色体核型的不同，唐氏综合征分为单纯21三体型、嵌合型和易位型三种类型。唐氏综合征的发生起源于卵子或精子发生的减数分裂过程中染色体的不分离现象，通常是随机发生的，约95％的不分离现象来源于母亲，仅5％左右发生在精子发生期。其结果是21号染色体多了一条，多出的一条染色体因剂量效应破坏了正常基因组遗传物质间的平衡，导致患儿智力低下，颅面部畸形及特殊面容，肌张力低下，多并发先天性心脏病，患者白血病的发病率为普通人群的10-20倍。生活难以自理，患者预后一般较差，50％左右于5岁前死亡。

目前对唐氏综合征缺乏有效的治疗方法。通过孕早、中期检测孕妇血中ΡΑΡΡ-Α，游离β-HCG，AFP等，结合B超检查，可将约90％的唐氏综合征检测出来。对高风险胎儿，通过绒毛活检或羊水穿刺或脐血穿刺等技术作染色体核型分析可以确诊，然后流产处理。

怀有唐氏综合征(DS)胎儿的孕妇，一部分人其血清F-P-HCG水平呈强直性升高，平均MOM值为2.3～2.4Μ0Μ。F-β-HCG在孕早期和孕中期都处于高水平。妊娠中期DS孕妇血清F-β-HCG浓度比正常至少高2倍。F-β-HCG用于DS风险的评估，敏感期可从孕早期到孕中期(7～20周)。

羊驼血清中存在的一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体(heavy-chainantibody，hcAb)。单域重链抗体(single domain antibody，sdAb)是指仅由重链抗体可变区(Variable region)组成的基因工程抗体，又称为VHH抗体(variable domain of heavychain of heavy-chain antibody，VHH antibody)或纳米抗体(Nanobody，Nb)。与传统抗体相比，单域抗体具有分子量小，稳定性高，水溶性好等优点，其次天然缺失轻链，洗脱时不会像传统抗体那样造成轻链脱落造成二次污染，因此可作为新一代的亲和纯化配体用于纯化β-HCG和检测试剂检测β-HCG。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗人促绒毛膜促性腺激素β亚单位的纳米抗体。

本发明的另一目的在于提供一种分离的核酸分子。

本发明的另一目的在于提供一种载体。

本发明的另一目的在于提供一种宿主细胞。

本发明的另一目的在于提供一种制备上述纳米抗体的方法。

本发明的另一目的在于提供一种试剂盒。

本发明的另一目的在于提供上述纳米抗体的应用。

本发明是这样实现的：