[发明专利]改进的痘病毒疫苗

说明书

本申请涉及用于痘病毒载体的新施用方案，所述载体包含编码抗原性蛋白质和不变链的核酸构建体。具体地，公开了所述痘病毒载体用于引发或加强免疫应答的用途。

本申请是基于申请日为2014年3月14日，优先权日为2013年3月15日，申请号为201480015680.2，发明名称为：“改进的痘病毒疫苗”的专利申请的分案申请。

发明领域

本申请涉及改进的痘病毒疫苗，其包含编码抗原性蛋白质和不变链的核酸构建体，以及用于这类痘病毒载体的新施用方案。具体地，公开了所述痘病毒载体用于引发或加强免疫应答的用途。

发明背景

感染性疾病仍然是人类的主要威胁。预防或治疗感染性疾病的一种方法是通过疫苗接种人工诱导免疫应答，所述疫苗接种是向个体施用抗原性材料使得产生针对相应抗原的适应性免疫应答。抗原性材料可以是结构完整但灭活(即，非感染性)或减毒(即，感染性降低)的病原体(例如，微生物或病毒)或者已被发现具有高免疫原性的病原体之纯化组分。诱导针对病原体的免疫应答的另一方法是提供包含一种或多种编码病原体之免疫原性蛋白质或肽的载体的表达系统。这样的载体可以是裸质粒DNA形式，或者通过使用病毒载体(例如基于经修饰痘苗病毒(例如，经修饰痘苗安卡拉病毒(Modified Vaccinia Ankara)；MVA))或腺病毒载体)来递送免疫原性蛋白质或肽。这样的表达系统的优点是包含良好表征的对环境条件具有低敏感性的组分。

在开发基于载体的表达系统时，一个特定目的是向患者应用这些表达系统以引发防御由各病原体引起之感染的免疫应答。但是，虽然诱导了对抗病原体的免疫原性应答，一些表达系统不能引发足够强从而完全防御由病原体所致感染的免疫应答。因此，仍然需要能够诱导针对病原体的保护性免疫应答的改进的表达系统以及引发增强的免疫应答的已知表达系统的新施用方案。

抗原是在抗原提呈细胞表面上通过MHC分子提呈的肽片段。抗原可以是外来的(即病原性)、起源于或来源自生物体本身，后者称为自身或自体抗原。有两类MHC分子，MHC I类(MHC-I)和MHC II类(MHC-II)。MHC-I分子提呈在相应细胞内合成的肽的片段。MHC-II分子提呈肽的片段，其通过吞噬作用被摄取，随后在核内体中消化。通常，MHC-II分子仅由“专门”抗原提呈细胞如巨噬细胞或树突细胞表达。结合MHC-II分子的抗原被T辅助细胞识别。T辅助细胞的T细胞受体对由MHC-II分子提呈的抗原的结合，连同由抗原提呈细胞分泌的细胞因子，诱导TH₀表型的未成熟T辅助细胞成熟为各种类型的效应细胞。

MHC-II分子是膜结合受体，其在内质网中合成并离开MHC II类区室中的内质网。为了阻止内源性肽(即自身抗原)结合MHC-II分子，新生的MHC-II分子与堵塞MHC-II分子的肽结合裂缝的另一蛋白质不变链组合。当MHC II类区室融合至含有吞噬并降解的蛋白质的晚期核内体时，不变链被切割以仅留下结合MHC-II分子的CLIP区。在第二步中，CLIP被HLA-DM分子移除，留下可自由结合外来抗原的片段的MHC-II分子。一旦MHC II类区室与质膜融合，所述片段就提呈在抗原提呈细胞的表面上，如此将外来抗原提呈给其他细胞，主要是T辅助细胞。

之前已发现(WO 2007/062656，公开为US 2011/0293704且通过提述并入本文以公开不变链序列)不变链与包含在用于疫苗接种的表达系统中的抗原的融合增加针对所述抗原的免疫应答，如果其与腺病毒一起施用的话。而且，在引发(prime)-加强疫苗接种方案的背景中，所述腺病毒构建体对于引发免疫应答证明是有用的(WO 2010/057501，公开为US2010/0278904且通过提述并入本文以公开编码不变链序列的腺病毒载体)。本发明人惊讶地发现，如果不使用腺病毒而是将痘病毒用于投递不变链抗原融合物，甚至能增强针对给定抗原的免疫应答。以此方式可以生成免疫应答。尤其令人惊讶的是，当用于引发免疫应答时，痘病毒载体也引起该效果。

发明概述

在第一方面，本发明涉及用于引发或加强免疫应答的包含核酸构建体的痘病毒载体，所述核酸构建体包含：